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GeneMay定制抗体服务

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Genemay>>>夹心ELISA方法的一般规程1.测定之前，应纯化两种抗体制剂，并必须标记一种。

2.对于大多数应用，最好使用聚氯乙烯（PVC）微量滴定板。但是，请参考制造商指南以确定最合适的蛋白质结合板类型。
3.通过向每个孔中添加大约50 µl抗体溶液（在PBS中20 µg / mL），将未标记的抗体绑定到每个孔的底部。PVC的结合力约为100 ng /孔（300 ng / cm2）。抗体的使用量取决于具体的检测方法，但是如果需要最大结合，则使用至少1μg/孔。这远远超过了孔的容量，但是结合将更快地发生，并且可以保存并再次使用结合溶液。
4.将板在4 ^o C下孵育过夜，以使其完全结合。
5.用PBS清洗孔两次。500 mL的喷水瓶很方便。可以通过在合适的容器上轻拂板来去除抗体溶液的洗涤液。
6.通过与封闭缓冲液一起孵育，必须将微量滴定板上蛋白质结合的其余位点饱和。用3％BSA / PBS和0.02％叠氮化钠填充孔至顶部。孵育2小时。室温下潮湿的环境中过夜。
7.用PBS清洗孔两次。
8.在孔中加入50 µl抗原溶液（应滴定抗原溶液）。所有稀释均应在封闭缓冲液（3％BSA / PBS）中进行。孵育至少2小时。在室温下潮湿的环境中。
9.用PBS清洗板四次。
10.添加标记的第二抗体。可以在初步实验中确定要添加的量。为了准确定量，应过量使用第二抗体。所有稀释均应在封闭缓冲液中进行。
11.孵育2小时。或更高的室温下在潮湿的气氛中。
12.用几种不同的PBS洗涤。
13.按照制造商的指示添加基材。经过建议的孵育时间后，可以在ELISA平板阅读器上测量目标波长下的光密度。（要获得定量结果，请将未知样品的信号与标准曲线的信号进行比较。每次测定都必须运行标准品，以确保准确性。）

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