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从果蝇幼虫或成虫头中分离RNA似乎有点困难，主要是由于角质层的存在。角质层是一种保护性外骨骼，由不溶性胶原蛋白、糖蛋白和脂质等组成。虽然去除角质层可能需要一些力，但可以很容易地做到这一点，而且不会影响RNA的产量或纯度。
一、辉骏生物—RNA分离所需材料清单 1.约20-50个成年头或10-20个幼虫 二、辉骏生物—果蝇成虫或幼虫分离RNA的基本步骤 1、将成虫或幼虫放在5mL的微量离心管中，用乙醇预先清洗。如果使用幼虫，要称量组织的重量。(如果组织不立刻使用,可以把管子放于液氮迅速冷冻，并于-80冰箱储存。)将管子放于冰上。 2、如果使用幼虫，请跳到第4步!如果使用成虫头部，管子漩涡两次，持续5秒，把头部和身体分开。头部可以通过以下几种方式与身体分离:将头部分离后，进行称重。 3、在干冰上放置一个塑料网，然后用小刷子或钳子转移到5mL的微量离心管中 使用黄铜筛。前筛(no.25)会让头去到底筛(no.40),将头部和身体分开。然后，头被转移到一个5mL的微量离心管中，使用一个小漏斗，一个小刷子或钳子。  5、组织进行匀浆。对于较大的组织，如幼虫，需要2分钟才能使组织完全均匀化。对于头部，通常需要一分钟。在进行下一步之前，确保组织被分解。 6、将匀浆在室温下孵育5分钟。 7、加氯仿到组织中，用力摇动管子15秒，室温孵育3分钟。 8、4°C离心,12000g15分钟。这时，会看到分层现象，RNA存在于上层水相。 9、将水相(颗粒上方的液体)转移到一个新的5mL离心管中，加入异丙醇，室温下放置10分钟。 10、4°C离心,12000g15分钟。此时，RNA存在于沉淀颗粒中。 11、丢弃上清液，用1ml75%乙醇冲洗颗粒，再用离心机离心5分钟。 12、丢弃上清液，真空或风干RNA颗粒15分钟。注意不能干透。 13、重悬颗粒于20uL的水中或其他缓冲液中，如1mMEDTA或0.5%SDS溶液(如果RNA要用于酶促反应，不要使用0.5%SDS!)孵育10分钟，通过水浴或加热于55°C可以促进重悬。注意对RNA的操作要温柔。
三、辉骏生物—RNA定量 分离RNA的最后一步是定量它的产量和纯度。有两种方法，一种是使用纳米滴管，但可能不是所有实验室都有。另一种是比较常用的分光光度计，在260nm测定样品的吸光度，可反映样品的总核酸含量，280nm可测定样品的纯度。如果A260:A280的比率约为1.8(或更高)，那么样本是纯的，可以使用提取的RNA进行实验应用。 |
