Mediomics-384孔格式的Bridge-It®cAMP磷酸二酯酶（PDE）检测试剂盒

SKU：PD1007。分类：384孔板，Bridge-It分析，cAMP，cAMP-PDE，细胞信号转导，细胞内信号转导，蛋白质-蛋白质相互作用。标签：384孔，Bridge-It，cAMP，PDE，磷酸二酯酶。

描述

384孔形式的Bridge-It®磷酸二酯酶（PDE）检测试剂盒

Bridge-It®磷酸二酯酶（PDE）分析是一种基于荧光的高通量筛选（HTS）方法，用于测量纯化来源的环核苷酸磷酸二酯酶活性并确定其抑制剂的IC 50。该测定法基于一种荧光测定法（Mediomics，Cat＃122938）中所有Bridge-It®cAMP的格式。

应用范围：

• 与PDE相关的药物发现项目

• 研究心脏，肺（即COPD），血小板功能和炎症机制

• 焦虑症或神经退行性疾病的研究

特征：

• 简便： 将测试样品或标准品与测定溶液混合并在〜25°C下孵育

• 快速： 孵育30分钟后读取荧光信号

• 灵活： 分析适用于低通量和高通量筛选形式

定价：  100孔试剂盒是一次性试用版。有关批量定价选项，请 与我们联系。如有其他疑问或意见，请随时 与我们联系。我们随时乐意为您服务！

 有关cAMP，PDE和Bridge-It荧光检测的背景信息

3'，5'-环磷酸腺苷（cAMP）

腺苷3'，5'-环一磷酸酯（cAMP）是重要的第二信使，涉及许多生物过程的调控。cAMP的测量在新药开发中尤其重要，因为cAMP水平与新药开发的主要目标之一-G蛋白偶联受体（GPCR）的活性密切相关。用于确定cAMP浓度的Mediomics荧光cAMP测定方法基于上述测定平台设计。基本上，CAP是一种细菌DNA结合蛋白，其DNA结合活性取决于cAMP的存在，被用作测量cAMP水平的高度特异性生物传感器。当PDE将cAMP水解为AMP时，cAMP的浓度降低，这导致更少的CAP-DNA复合物形成和更多的带有探针的“半位点”双链体（未淬灭）。

Bridge-It®PDE分析– cAMP标准曲线

以下cAMP标准曲线代表了使用Bridge-It®PDE分析制备的曲线。它显示了在384孔板上的缓冲液B中制备的标准曲线，在添加2X分析溶液后30分钟，1小时和2小时后读取了荧光信号。

Bridge-It®PDE分析– PDE活性分析

以下PDE活性测定代表使用Bridge-It®PDE测定制备的那些。在具有指示量的来自牛脑的PDE（Sigma，St.Louis，MO，Cat＃P9529）的样品中测量相对活性。将反应在室温温育30分钟，并通过添加0.5ul终止溶液终止。加入2X测定溶液，并在室温下孵育40分钟后读取信号。

Bridge-It®PDE测定– IC50测定

以下测定代表了使用Bridge-It®PDE测定制备的那些。在来自牛脑的0.8 mU PDE样品（西格玛，圣路易斯，MO，目录号P9529）和指示量的IBMX（西格玛，圣路易斯，MO）中测量相对活性。

注意：RA（相对活动）的定义在协议的第8页上。在1个PDE反应缓冲液（25 mM Tris，pH 7.4，100 mM NaCl，BSA 0.1 mg / ml，CaCl2 0.03 mM，钙调蛋白（Sigma，密苏里州圣路易斯市（Cat＃P1431）10 U / ml），牛脑中有0.8 mU PDE（西格玛，圣路易斯市，Cat＃P9529）和指定量的IBMX（西格玛，圣路易斯市） ）。混合酶和IBMX，并在室温下预孵育5分钟。添加6pmole cAMP，并将反应在室温下温育30分钟，并通过添加0.5ul终止溶液终止。加入2X测定溶液，并在室温下孵育40分钟后读取信号。

研究用途：仅用于研究用途，不能用于诊断程序。

有关测定原理的信息，请参见 Bridge-It测定技术平台 页面或下载协议。 本产品受专利和正在申请专利的保护。

使用Mediomics的Bridge-It®cAMP-PDE荧光检测试剂盒的部分客户出版物：

1. 发酵生产酒精。 Bhadra B，Bhalla R，Kruckeberg AL，Nagarajan V，Patnaik R，Suh W，发明者；Butamax Advanced Biofuels LLC，受让人。 US9909148B2。 2018三月6。

2. Pi3k / Akt途径的激活和通过膜孕激素受体-α（mPRalpha）调节磷酸二酯酶活性调节大西洋黄花鱼中孕激素引发的精子活力。 Tan W，Thomas P.  Biol复制。 2014年5月； 90（5）：105。

3. 细胞外信号调节激酶5在脂肪细胞信号传导中的作用。 朱华，Guariglia S，李威，Brancho D，王志伟，Scherer PE，周正威。 J生物化学。 2014年2月28日； 289（9）：6311-22。

4. NMRA / NMRAL1同源蛋白PadA调节盘基网柄菌在聚集过程中胞外cAMP中继基因的表达。 Garciandia A，Suarez T.  Dev Biol。 2013年9月15日； 381（2）：411-22。

目录编号：  PD1007-100，PD1007-384

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苏州蚂蚁淘生物科技有限公司是一家创新型高科技生物公司，以常规生物学实验外包与生物学试剂为基础，放眼于生命科学领域的前沿技术服务，公司技术骨干有着多年的生物学科研背景，毕业于国内外名牌大学，并且有着丰富的项目经验，了解国内外科研行情，我公司力求为每一个客户提专业、针对性的实验方案。我公司以技术服务为支点，和国内外多家生物试剂公司有着密切的业务往来.公司特色技术服务包括：抗体药物研发、噬菌体抗体库、蛋白表达与传化、抗体制备、高通量测序、组学研究、生物信息学分析与方法建立、基础分子生物学技术外包、化学中间体合成、原料药物研发、论文编写等。我公司秉承”诚信做人，认真做事，服务至上“，希望用我们的专业知识和项目经验为国内科研客户解决科研问题，祝您科研之路畅通无阻！

Mediomics-TR-FRETBridge-It®L-蛋氨酸（L-Met）荧光测定试剂盒，384孔格式SKU：TRF-1-1-1006。分类：384孔板，DNA甲基化，细胞内信号传导，L-蛋氨酸，TR-FRET Bridge-It分析。标签：384孔，Bridge-It，L-Met，L-蛋氨酸，TR-FRET。描述TR-FRETBridge-It®L-蛋氨酸（L-Met）荧光测定试剂盒，384孔格式  应用范围：直接测量样品中的L-Met水平以Met为底物或以Met为产物的酶的测定（即蛋氨酸氨基肽酶） 特征：简便： 将测试样品或标准品与测定溶液混合并孵育。绝对没有洗手步骤！快速： 孵育50分钟后读取荧光信号灵敏的： 检测L-蛋氨酸的检测下限为10 µM灵活： 可以以FRET和TR-FRET格式进行测定，也可以根据要求将其调整为比色格式。 特异性：与标准氨基酸或L-Met衍生物（L-Met亚砜和L-Met砜）无交叉反应。L-蛋氨酸和TR-FRETBridge-It®荧光检测的背景信息L-蛋氨酸（L-蛋氨酸）L-蛋氨酸是必需氨基酸，必须从食物来源或膳食补充剂中获取。它是其他硫化合物（包括半胱氨酸，牛磺酸和谷胱甘肽）的前体。蛋氨酸与三磷酸腺苷反应形成S-腺苷甲硫氨酸（SAM），它是体内主要的甲基供体，有助于合成许多重要物质，包括肾上腺素和胆碱。L-蛋氨酸也是动物饲料的重要补充。当前，使用高压液相色谱法（HPLC）对L-蛋氨酸进行定量。HPLC是费时的，昂贵的，并且由于需要大量的有机溶剂而不环保。 TR-FRETBridge-It®L-蛋氨酸荧光（L-Met）测定1,2真核细胞含有估计的3,000种序列特异性DNA结合蛋白。这些重要的蛋白质在有或没有特定的小分子共调节剂（配体）的情况下均可控制基因组DNA活性的所有方面，包括基因表达，DNA复制和DNA修复。Mediomics正在利用其新颖的荧光测定平台来开发体外测定，可用于快速，灵敏地定量DNA结合蛋白及其小分子配体的活性。所有序列特异性DNA结合蛋白的共同特性是它们以高亲和力和特异性结合到包含独特核苷酸序列的DNA双链体的能力，即该蛋白的DNA结合位点。Mediomics的新型测定平台依赖于这一共同特征。包含给定目标DNA结合蛋白的序列特异性DNA结合位点的DNA双链体被分成两个DNA“半位点”双链体，每个双链体均具有短的单链突出端。这些单链延伸足够短，以致在没有靶蛋白的情况下几乎没有自发的重新结合。但是，当存在目标蛋白质时，其对全长DNA序列的高亲和力将推动两个半位点DNA双链体的重新结合。通过将两个荧光团系统[一个供体（Eu3 +）和一个受体]掺入两个DNA半位中的每个位点，可以灵敏地检测到这种重新结合。在该测定中，DNA结合蛋白充当其特异性配体（SAM）的生物传感器。配体与DNA结合蛋白结合，通过构象变化激活结合位点。作为两种荧光团之间的时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）的结果，检测到活化的DNA结合蛋白的存在是受体荧光团的荧光信号增加或供体荧光团的荧光信号减少。 。 Bridge-It®L-蛋氨酸荧光分析方法具有非常理想的性能特征，包括高的信噪比（S / B），良好的线性动态范围以及约10μM的检测限。总测定时间为50分钟。注意： 此标准曲线仅供参考。请生成自己的标准曲线。与HPLC程序相反，Bridge-It®L-蛋氨酸荧光测定法利用384和96孔微孔板形式。因此，它非常适合快速，同时测量大量测试样品中L-蛋氨酸的水平。而且，该方法很容易适应当前在药物发现研究中使用的高通量筛选平台。 定价：  100孔试剂盒是一次性试用版。有关批量定价选项，请 与我们联系。如有其他疑问或意见，请随时 与我们联系。我们随时乐意为您服务！ 有关测定原理的信息，请参见 TR-FRETBridge-It®测定技术平台 页面或下载协议。 本产品受专利和正在申请专利的保护。 Bridge-It®L-蛋氨酸测定的TR-FRET版本是全新的，因此目前没有参考。但是，以下是使用我们的Bridge-It®L-蛋氨酸测定试剂盒的出版物。使用Mediomics的Bridge-It L-蛋氨酸荧光分析试剂盒的部分客户出版物：1. Batra V，VermaP。 膳食L-蛋氨酸补充可缓解γ-辐射诱导的整体DNA甲基化不足：增强的S-腺苷-1-蛋氨酸（SAM）生物合成代谢通量可增加基因组甲基化的潜力。 食品化学毒物。2014年7月； 69：46-54。—“…1-蛋氨酸和SAM分析试剂盒购自Mediomics Inc.（美国密苏里州圣路易斯）。”2. Murray TVA，Dong X，Sawyer GJ，Caldwell A，Halket J，Sherwood R，Quaglia A等。NADPH氧化酶4调节同型半胱氨酸代谢，并防止对乙酰氨基酚引起的小鼠肝损伤。自由基生物学和医学。2015年。—“按照制造商的方案，使用Bridge-It®蛋氨酸（l-Met）荧光测定法（Mediomics）测定了Wt和Nox4-/-小鼠肝脏提取物中的蛋氨酸含量。”单击此处以获取我们的客户出版物的完整列表。 Bridge-It®是美国密苏里州圣路易斯的Mediomics，LLC的注册商标，Mediomics拥有密苏里州圣路易斯的圣路易斯大学对该测定平台的全球独家许可。Bridge-It®L-蛋氨酸荧光测定试剂盒仅供实验室研发使用。本产品未经美国政府或世界其他任何国家的政府批准，可用于人类或动物疾病的临床诊断或疾病治疗。Oyster®是德国明斯特的Denovo Biolabels，GmbH的注册商标。威斯康星州麦迪逊的Flownamics®Analytical Instruments，Inc.是美国Oyster®染料的授权分销商。目录编号： TRF-1-1-1006A（100次测量-试用尺寸），TRF-1-1-1006B（384次测量）