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艾卡(广州)仪器设备有限公司(德国IKA/艾卡)

chromotek介绍

德国ChromoTek公司成立于2008年,致力于细胞生物学和蛋白质组学的研发与研究,公司拥有强大的研发团队,有先进的生物制剂,主要主要使命是花费较少的时间和成本,使客户获得得高质量的实验数据。

德国ChromoTek公司联合中国专业的生物技术服务提供商-BioTNT,针对中国市场的实际情况,推出全世界可靠的GFP相关产品。

ChromoTek的产品分类:

一、Nano-Trap系列;以产品结合物为标准,包含磁珠系列和琼脂糖珠子系列,还有96板系列;抗体结合物包括GFPTrap,RFPTrap,GSTTrap,Dnmt1-Trap;Mk2-Trap;P53-Trap;Mdm4/HdmX-Trap

二、Booster系列;含GFPboosterRFPbooster;

三、可用于HCA实验的Chromobodies(质粒或细胞系形式);

四、高品质抗体(标签蛋白抗体和普通抗体);

产品一:

GFP-Trap?值得信赖的科研工具:

Nano-Trap:与agarosebeads或者magneticbeads结合,在免疫沉淀或蛋白质相互作用的实验中,可抓取或纯化GFP或RPF融合蛋白。(优点:三好三多)

优点一:抗体好---------Nano-Traps采用的抗体是基于alpaca的单域抗体片段(VHHS);具有分子量小(15Kda)、极端稳定(70℃仍保持稳定),高亲和力(高特异性性结合GFP蛋白),无普通抗体轻链与重链污染等一系列优点等优点;GFP抗体可以特异性结合绿色荧光蛋白的衍生物,如eGFP,wtGFP,GFPS65T,TagGFP,不与RFP衍生蛋白结合。

优点二:形式好-------抗体结合了agarosebeads(琼脂糖珠子)或者magneticbeads(磁珠),在IP实验,COIP,pulldown,Chip实验中可以直接取代特异性GFP抗体+proteinA/G琼脂糖珠子;

优点三:效果好------孵化时间短(只需5-30min),能够更好与结合,从细胞提取物或细胞器中定量分离GFP融合蛋白及结合因子

优点四:实验应用多:被广泛用于免疫沉淀、质谱分析、酶活测定、生物大分子相互作用/亲和力实验、染色质免疫沉淀(ChIP)、蛋白质相互作用分析;

优点五:产品多:有GFPTrap,RFPTrap,GSTTrap,Dnmt1-Trap;Mk2-Trap;P53-Trap;Mdm4/HdmX-TrapNEW!更多Trap新品,给您提供更多的科研工具!GFP,RFP,GSTTrap作为标签蛋白的特异性纯化方法,Dnmt1-Trap;Mk2-Trap;P53-Trap;Mdm4/HdmX-Trap是用于纯化目的蛋白。

优点六:样品类型多:mammaliancells(哺乳细胞);tissues/organisms(组织/器官样本);bacteria(细菌);yeast(酵母);plants(植物样本)

仅需六个步骤,30min仅需6个步骤,30min实验,ChromotekGFP-Trap?_A的5大实验应用:


收集细胞细胞裂解平衡beads结合蛋白,加入裂解的细胞清洗beads洗脱蛋白

免疫沉淀

酶活测定

Co-IP

Pulldown

ChIP

后期实验

Westernblot

酶活测定

沉淀的蛋白质复合物采用SDS-Page跑胶,westernblot鉴定预测作用蛋白Y,或样品利用质谱后续分析。

洗脱的复合物;同时进行GFP和第二标签的westernblot实验。

交联反应逆转,DNA纯化,DNA鉴定(如用QPCR或者chip实验),同普通CHIP实验

nanotrap替代的产品

GFP单克隆/多克隆抗体+ProteinA/G琼脂糖微珠

GFP单克隆/多克隆抗体+ProteinA/G琼脂糖微珠

GFP单克隆或多克隆抗体+ProteinA/G琼脂糖微珠

GST标签蛋白的亲和层析柱或琼脂糖微珠

GFP单克隆或多克隆抗体+ProteinA/G琼脂糖微珠

目的

弱GFP蛋白样品的富集;或后期实验

可以用beads直接测定酶活

蛋白-蛋白相互作用,一般验证体内的蛋白互作

蛋白-蛋白相互作用,一般验证体外的蛋白互作

蛋白-DNA相互作用

(1)实验不同,裂解的细胞不同;pulldown加入的是GFP融合蛋白和第二标签融合蛋白的裂解物;chip实验为细胞固定步骤,染色质断裂步骤;

实验不同,加入的裂解物不同;chip实验加入的为断裂的DNA-蛋白复合物;

(2)GFP-Trap用于IP实验(Immunoprecipitation)(免疫沉淀)和Co-IP实验(免疫共沉淀):

Co-IP实验(Co-Immunoprecipitation)(免疫共沉淀)原理图

传统IP

GFP-Trap用于IP

传统Co-IP

GFP-Trap用于Co-IP

A

B

C

D

实验原理

抗体与细胞裂解液或上清中相应蛋白结合后,再与蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶联的agarose珠子孵育,得到蛋白复合物,洗脱蛋白。

细胞裂解液或上清中的GFP融合蛋白与GFP-Trap孵育,得到蛋白复合物,洗脱蛋白。

细胞非变性条件下裂解,完整胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。结合的实验原理同A/B

目的

得到纯化的蛋白或进行后期实验

同A

研究蛋白质相互作用

后期实验

洗脱的蛋白采用SDS-Page跑胶,采用GFP抗体westernblot进行鉴定。

沉淀的蛋白质复合物采用SDS-Page跑胶,westernblot鉴定,也可利用质谱进行后续分析。

时间

长,超过一天

短,30min

同A

同B

步骤

多,超过20个步骤

少,仅需6个步骤

同A

同B

特异性

普通抗体特异性不高

羊驼抗体,特异性高

同A

同B

使用产品

可选用特异性抗体或GFP单克隆或多克隆抗体+ProteinA/G琼脂糖微珠

GFP抗体-琼脂糖珠子,RFP-Trap,GST-Trap,Dnmt1-Trap

同A

同B

适用性

通用方法,适合面宽

有GFP,RFP,GST,Dnmt1-Trap等4个品种的标签蛋白Trap可选

同A

同B

产物

纯度不高

纯度高,对比见下左图


Nano-Traps主要产品见表:

品牌

货号

品名

规格

价格

GFP-Trap?

Chromotek

gta-10

GFP-Trap?,coupledtoagarose

10rxns

2000

Chromotek

gta-20

GFP-Trap?,coupledtoagarose

20rxns

6700

Chromotek

gta-100

GFP-Trap?,coupledtoagarose

100rxns

27090

Chromotek

gta-200

GFP-Trap?coupledtoagarose

200rxns

48240

Chromotek

gta-400

GFP-Trap?coupledtoagarose

400rxns

84330

Chromotek

gtak-20

GFP-Trap?coupledtoagarosekit

20rxns

8400

Chromotek

gtm-20

GFP-Trap?coupledtomagneticbeads

20rxns

6700

Chromotek

gtm-100

GFP-Trap?coupledtomagneticbeads

100rxns

27090

Chromotek

gtm-200

GFP-Trap?coupledtomagneticbeads

200rxns

5360

Chromotek

gtp-96

GFP-multiTrap?,black96wellplate

1pc

4100

Chromotek

gtp-96

GFP-multiTrap?,black96wellplate

5pc

15600

Chromotek

gtm-400

GFP-Trap?coupledtomagneticbeads

400rxns

84330

Chromotek

gtmk-20

GFP-Trap?coupledtomagneticbeadskit

20rxns

8400

Chromotek

gt-250

GFP-Trap?freeprotein

250g

4500

RFP-Trap?

Chromotek

rta10

RFP-Trap?,coupledtoagarose

10rxns

2000

Chromotek

rta20

RFP-Trap?,coupledtoagarose

20rxns

6700

Chromotek

rta100

RFP-Trap?,coupledtoagarose

100rxns

27090

Chromotek

rta200

RFP-Trap?,coupledtoagarose

200rxns

5360

Chromotek

rta400

RFP-Trap?,coupledtoagarose

400rxns

84330

Chromotek

rtak-20

RFP-Trap?,coupledtoagarose,

20rxns

8400

Chromotek

rt-250

RFP-Trap?,freeprotein

250g

4500

GST-Trap

Chromotek

stm-10

GST-Trap?,coupledtomagneticbeads

10rxns

2000

Chromotek

stm-20

GST-Trap?,coupledtomagneticbeads

20rxns

6700

Chromotek

stm-100

GST-Trap?,coupledtomagneticbeads

100rxns

27090

Chromotek

stm-200

GST-Trap?,coupledtomagneticbeads

200rxns

48240

Chromotek

stm-400

GST-Trap?,coupledtomagneticbeads

400rxns

84330

Chromotek

stmk-20

GST-Trap?,coupledtomagneticbeads,kit

20rxns

8400

Chromotek

st-250

GST-Trap?,freeprotein

250g

4500

Dnmt1-Trap

Chromotek

dta-10

Dnmt1-Trap,coupledtoagarose

10rxns

2000

Chromotek

dta-20

Dnmt1-Trap,coupledtoagarose

20rxns

6700

Chromotek

dta-100

Dnmt1-Trap,coupledtoagarose

100rxns

27090

Chromotek

dta-200

Dnmt1-Trap,coupledtoagarose

200rxns

48240

Chromotek

dta-400

Dnmt1-Trap,coupledtoagarose

400rxns

84330

Chromotek

dtak-20

Dnmt1-Trap,coupledtoagarose,kit

20rxns

8400

Chromotek

dt-250

Dnmt1-Trap,freeprotein

250g

4500

BindingControls

Chromotek

bab-20

Blockedagarosebeads(bindingcontrol)

500l(20rxns)

1500

Chromotek

bmp-20

Blockedmagneticparticles(bindingcontrol)

500l(20rxns)

1500

产品二:

Nano-booster是利用Atto公司的荧光素共价结合到特异性GFP抗体上;当GFP融合蛋白信号比较弱的时候,或者荧光蛋白变性后,具有再激活的作用。

在研究活细胞中蛋白定位和动力学的过程中是不是会有如下的困惑:

1.固定样品中细胞表达的荧光融合蛋白信号强度在生理表达水平通常很低?

2.荧光蛋白的耐光性和量子效率达不到超分辨显微镜的要求(如:3D-SIM,STED或STORM/PALM)?

3.许多细胞生物学方法如Hcl处理的BrdU检测,EdU-Click-It处理或者热变性的荧光原位杂交(FISH)会干扰荧光融合蛋白信号的检测,需要重新激活GFP信号?

优点:

优点一:抗体好---------Nano-Boostern采用的抗体是基于alpaca的单域抗体片段(VHHS);具有分子量小(15Kda)、极端稳定(70℃仍保持稳定),高亲和力(高特异性性结合GFP蛋白),无普通抗体轻链与重链污染等一系列优点等优点;GFP抗体可以特异性结合绿色荧光蛋白的衍生物,如eGFP,wtGFP,GFPS65T,TagGFP,不与RFP衍生蛋白结合。

优点二:Atto公司的荧光素,具有增强荧光的作用;

优点三:作用效果好:

1、作为荧光增强剂使用;

2、对变性荧光蛋白具有再激活作用;

3、不仅能够增强信号,还能够增加荧光蛋白荧光稳定性。

优点四:产品多:不仅有GFPbooster,还有RFPbooster;

NanoBooster产品应用:

1、产品实验方法:免疫荧光(IF),免疫组化(IHC);

2、产品使用材料:细胞系,组织切片;

3、产品应用方向:荧光显微镜,激光共聚焦显微镜,超分辨率显微镜(3D-SIM,PALM,STED,STORM);

实验结果改进示例:

实验应用:

上图:比较HeLa细胞系核表达的GFP-融合蛋白,GFP信号增强(GFP-Booster_Atto488使用前和使用后)由用户确定适当的稀释倍数。

EdU-Click-iT?处理会导致GFP信号的毁坏。GFP-Booster标记了GFP融合蛋白,因此有激活和加强荧光信号的作用(稀释比例1/200,1hatRT)(GFP-BoosterwithEdU-Click-iT?protocol)。下图:GFP-Dnmt1融合蛋白,三色荧光检测,同时检测红色:5EdU-Click-iT?AlexaFluor594信号;绿色,结合了GFPBooster信号;蓝色,DAPI信号(在EdU-Click-iT?处理后GFPBooster)

Nano-booster主要产品见下表:

货号

品名

规格

价格

GFP-Booster

Chromotek

gba488-TS

GFP-Booster_atto488-TS

50g

2500

Chromotek

gba488

GFP-Booster_atto488

100g

5400

Chromotek

gba-647N

GFP-Booster-Atto647N

100g

询价

Chromotek

gBDl-650-TS

GFP-Booster-Atto647N

50g

询价

Chromotek

gba-594

GFP-Booster-Atto594

100g

询价

RFP-Booster

Chromotek

rba594-TS

RFPBoosteratto594TS

50ug

2500

Chromotek

rba594

RFP-Booster_atto594

100g

5400

Chromotek

rbdl-650-TS

RFP-Booster-Atto650ts

50g

询价

Chromotek

rba-700

RFP-Booster-Atto700

100g

询价

Chromotek

rba-488

RFP-Booster-Atto488

100g

询价

备注:Invtrogen新推出的Click-iT?EdU检测也是以检测新合成DNA中掺入的核苷类似物为基础,但该方法所采用的核苷类似物是EdU,而且不是通过抗体检测,而是基于一个click反应--铜催化的叠氮化物和炔烃之间的共价反应。Click-iT检测避免了BrdU检测所需的苛刻处理条件,可避免DNA变性,维持样本的形态,因而提供了一种更可靠且更简单的方法进行细胞增殖检测。

DAPI,是一种能够与DNA强力结合的荧光染料,常用与荧光显微镜观测。因为DAPI可以透过完整的细胞膜,它可以用于活细胞和固定细胞的染色。在荧光显微镜观察下,DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。当DAPI与双股DNA结合时,大吸收波长为358nm,大发射波长为461nm,其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。所以不会影响绿色荧光蛋白的观测。

产品三:Chromobodies

ChromoTek公司的Chromobodies?是一种新的极其微小的细胞内功能抗体。它是基于融合有荧光蛋白(e.g.TagGFPorTagRFPfromEvrogen)的来自羊骆抗体重链的抗原结合域结构(VHH)。和普通抗体不同的是,这些创新的荧光纳米探针可以使活细胞的结构和进程实时分析和可视化。因此,Chromobodies?是做研究细胞内研究包含高含量分析(HCA)的一种新的理想试剂。

除了稳定细胞株,你也可以得到Chromobody?质粒,它允许你创建自己的细胞系或瞬时表达Chromobody?。

所有Chromobody?结合域都是经过精心挑选,以不干扰内源性蛋白质的功能,并提供了独特的机会来标记活细胞中天然蛋白

产品形式:质粒或者细胞系产品。

Chromobodies系列产品见下表:

ActinChromobody

货号

Chromotek

品名

规格

价格

dcg

Chromotek

Dnmt1-Chromobody?plasmid,Dnmt1-GFP

20g

14900

dcr

Chromotek

Dnmt1-Chromobody?plasmid,Dnmt1-RFP

20g

14900

ccg

Chromotek

CellCycleChromobody?plasmidPCNAGFP

20g

14900

ccr

Chromotek

CellCycleChromobody?plasmidPCNARFP

20g

14900

lcg

Chromotek

LaminChromobody?plasmid,Lamin-GFP

20g

14900

lcr

Chromotek

LaminChromobody?plasmid,Lamin-RFP

20g

14900

acg

Chromotek

ActinChromobody?plasmid,Actin-GFP

20g

14900

acr

Chromotek

ActinChromobody?plasmid,Actin-RFP

20g

14900

产品系列四:

ChromoTek推出一系列高质量常见抗体见下表:

荧光标签抗体

货号

品牌

品名

规格

价格

3f5

Chromotek

RFPantibodymousemonoclonal

100g

3900

5f8

Chromotek

RFPantibodyratmonoclonal

100g

3900

3h9

Chromotek

GFPantibody,ratmonoclonal

100g

3900

标签抗体

货号

品牌

品名

规格

价格

6g9

Chromotek

GSTantibody,ratmonoclonal

100l

3900

6f7

Chromotek

FLAGantibody,ratmonoclonal

100g

3900

9E1

Chromotek

c-Mycantibody,ratmonoclonal

100g

3900

7c9

Chromotek

HAantibody,ratmonoclonal

100g

3900

目的蛋白抗体

货号

品牌

品名

规格

价格

2e8

Chromotek

Dnmt1antibody,ratmonoclonal

500l

4900

2e8ts

Chromotek

Dnmt1antibody,ratmonoclonal

125l

2000

16d10

Chromotek

PCNAantibodyratmonoclonal

100g

4900

16d10ts

Chromotek

PCNAantibodyratmonoclonal

25g

2000

4b8

Chromotek

Ago1antibody,ratmonoclonal

100g

5400

4b8ts

Chromotek

Ago1antibody,ratmonoclonal

25g

2000

11a9

Chromotek

Ago2antibody,ratmonoclonal

100g

5400

11a9ts

Chromotek

Ago2antibody,ratmonoclonal

25g

2000

1c7

Chromotek

RNAPolIICTD,unphosphorylatedCTD

5ml

5400

1c7ts

Chromotek

RNAPolIICTD,unphosphorylatedCTD

1ml

2000

3d12

Chromotek

RNAPolIICTD,phos.Tyrosine1

5ml

5400

3d12ts

Chromotek

RNAPolIICTD,phos.Tyrosine1

1ml

2000

3e10

Chromotek

RNAPolIICTD,phos.Serine2

5ml

5400

3e10ts

Chromotek

RNAPolIICTD,phos.Serine2

1ml

2000

6d7

Chromotek

RNAPolIICTD,phos.Threonine4

5ml

5400

6d7ts

Chromotek

RNAPolIICTD,phos.Threonine4

1ml

2000

3e8

Chromotek

RNAPolIICTD,phos.Serine5

5ml

5400

3e8ts

Chromotek

RNAPolIICTD,phos.Serine5

1ml

2000

4e12

Chromotek

RNAPolIICTD,phos.Serine7

5ml

5400

4e12ts

Chromotek

RNAPolIICTD,phos.Serine7

1ml

2000


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