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Santa Cruz Biotechnology 现在提供针对超过 18,910 个人类和 18,340 个小鼠蛋白质编码基因的靶向特异性 CRISPR/Cas9 敲除 (KO) 质粒、CRISPR 双切口酶质粒、CRISPR/dCas9 激活质粒和 CRISPR Lenti 激活系统。

CRISPR/ CAS系统是一种细菌和古细菌用于外源遗传物质的降解的适应性免疫防御机制。在这些生物体中,来自噬菌体的外源遗传物质获得和整合入CRISPR位点 (12)。这种新材料,也称为间隔区,建立用于将来对噬菌体感染性的序列特异性的片段。这些序列特异性的片段 被翻 译成短CRISPR的RNA(crRNAs),其功能为经由CRISPR相关(Cas)蛋白的核酸酶活性,由CRISPR位点编码导向,互补侵入 DNA裂解(12)。 II型CRISPR系统Cas9核酸酶具有RNA结合域,α螺旋识别叶(REC),核酸叶,其中包括RuvC和HNH的DNA裂解和 前间区序列邻近基序(PAM)交叉位点(1 ,2)。 crRNA形成与Cas9核酸酶的复合通过结合到REC叶内桥螺旋,并形成多个具有crRNA骨干的盐桥 (123)。

一旦crRNA结合到Cas9,Cas9核酸酶的构象发生改变,产生一条能通道,让DNA更容易结合。Cas9/crRNA复合体扫描DNA找到PAM (5'-NGG)位点(4,5,6)。识别PAM位点导致DNA解旋,使crRNA找到PAM位点相邻的DNA互补链。当Cas9结合到PAM位点相邻的,与crRNA互补的DNA序列上,REC叶内部的桥螺旋和靶DNA形成RNA-DNA 异源双链结构。PAM位点的识别包括可使靶DNA双链断裂(DSB)的HNH和RuvC核断裂的激活,和导致DNA降解(1,2,5,8)。如果crRNA与靶DNA不互补,Cas9将会释放出来,寻找新的PAM位点(7)。DNA中的线性靶基因组断裂后可以通过非同源末端接合(NHEJ)或者同源介导的修复(HDR)来进行修复。非同源末端接合(NHEJ)会引起插入或者删除错误。同源介导的修复(HDR)可在基因组(2,9,10)的特异性位点结合特定标记。CRISPR/Cas9机制可用于包括哺乳动物细胞在内的各种系统的基因工程中。

采用DSBs进行基因编辑,可以用大范围核酸酶,锌指核酸酶(ZF),或者反式激活因子样的感受器(TALEs)进行,它们可以识别DNA序列,然而,每种方法都有它们的局限性。当使用大范围核酸酶时,难以清楚的显示核酸酶和DNA之间的位点专一识别 (2)。其他选项,ZFs和TALEs,已证明难以设计和识别DNA的3个核苷酸。作用像crRNAs的单个导向RNAs (sgRNAs) 容易设计,还能和Cas9核酸酶在同一载体中一起表达,针对特定DNA位点进行基因编辑。当用于筛选时, CRISPR/Cas 9系统比短发卡RNAs具有更高的敏感性和更高的效率。

使用CRISPR/Cas9系统来减少DSB在基因组DNA的一个重要优势是它的高效。然而这个效率能被一些脱靶效应影响,因此减少CRISPR/Cas9编辑的特异性。特异性能通过使用CRISPR双切口酶系统完善,凭借一对质粒,每一个编码Cas9 (D10A)切口酶突变体(Cas9n)都是通过利用特异的向导RNA来针对明显的基因组DNA特定区域(12)。每个Cas9n/sgRNA复合体仅创造了一个DNA链缺口,是用来让向导RNA补充进来(12)。每对向导RNA被近20个碱基对抵消,并且识别出靶向DNA反义链上的目标序列。一对Cas9n/sgRNA复合体制造了类似于DSB (12)的双切口。因此,成对向导RNA的使用需要考虑到Cas9-调停基因编辑的特异性的增加,同时保持高水平的效率(12)。

除基因组编辑技术之外,CRISPR系统可以被改造成内源基因表达上调的系统(13)。通过修饰CRISPR系统中的一些元件,形成协同激活介质(SAM)复合物,成为一种高效特异地转录激活系统 (13)。SAM复合物中的一个元件是修饰过的Cas9核酸酶。SAM系统中,灭活Cas9的催化域形成dCas9后与转录激活域 (vp64)进行融合。经靶特异向导RNA (sgRNA)引导,dCas9-VP64-sgRNA复合物靶向内源基因转录起始位点(Transcriptional Start Site (TSS))的-200bp处,上调基因表达(13)。为了进一步提高转录效率,在sgRNA四环和第二个茎环上附加小发夹适配子(minimal hairpin aptamer) 方式修饰sgRNA(13)。经过修饰后,sgRNA上的适配体选择性地与二聚体的MS2噬菌体外壳蛋白结合(13)。 MS2蛋白与p65及HSF1转录激活域融合后形成MS2-P65-HSF1融合蛋白增强转录因子的招募,从而提高dCas9介导的基因活化效率(13)。 激活产品有两种形式,一种是用于转染的标准质粒,还有一种是用于慢病毒包装和转导的慢病毒质粒,它可以高效地将SAM转录激活系统递送到所有的细胞(13)



Santa公司是世界上zui大的抗体生产厂家,目前可提供的抗体种类多达两万多种,几乎覆盖了目前生命科学研究的各个领域,其每种抗体又有多个克隆可以选择,还提供一些对应蛋白标准品及相关产品,如ABC试剂盒,各种标记二抗,Western试剂盒,蛋白分子量Marker,核抽提物等,为免疫学研究工作提供了极大的方便。

圣克鲁斯生物技术在生物医药研究市场的发展中处于世界地位。在过去的二十多年中,公司一直致力于研究抗体、生化试剂、实验室耗材的持续发展,并于近期扩展到动物保健品领域。


Santa Cruz Biotechnology, Inc.向你提供一个完整的 RNAi 基因沉默子系列,包括 siRNA, shRNA 质粒和 shRNA 慢病毒产品, 涵盖了超过 > 99% 的人类和小鼠蛋白编码基因。

RNA 干扰(RNAi)现象首次由诺贝尔奖获得者 Fire 和 Mello 在 C. elegans 中发现(1),现在已成为分子生物领域最重要的发现之一。内源性 RNAi 活性与转位子变异性的调节(2),决定基因表达路径 (3)以及细胞命运(4)有关,是先天性细胞防御病毒感染的一个重要因素(5)。已经确定有三种 RNAi 机制对靶基因表达进行控制。RNAi 通过修改异染色质形成调节基因转录(6)。RNAi 使用两种转录后控制形式。第一,RNAi 可抑制目的 mRNA 翻译(7)。第二,RNAi 可直接通过 RISC 复合物降解目的 mRNA(8)。DICER 第一步处理是将 dsRNA 在 3' 端留出两个核苷酸碱基突出。由此启动 dsRNA 与 RISC 复合物结合并激活 argonaute 酶 (RISC 复合物 RNAse 成分),降解一股 RNA 链。保留的前导链,通过互补使 RISC 复合物与相关的RNA结合,然后导致目的RNA被剪切。

RNAi 的发现给研究者带来了一个强有力的实验工具并且成为一种被看好的潜在的治疗手段,发现者 Andrew Z. Fire and Craig C. Mello 由此获得了 2006 年度诺贝尔生理和医学奖。在实验研究中 RNAi 分子正被用于各种有机体和细胞的单一靶基因表达的抑制调节,以探索其上述三种作用机制。这项技术对于控制试验系统研究单一基因和蛋白功能以及与其它基因和蛋白的关系是非常有用的。RNAi 也具有令人鼓舞的潜在临床前景1。

这些 RNAi 作用机制的细节是众多研究的重要课题,还有许多未知等待阐明。而 RNAi 通过 RISC 复合物控制目的 mRNA 降解的作用模式则是对其机理的最详细的描述,也是最被接受的学说。



公司旨在为客户提供高质量的实验外包服务(CRO服务),包括实验方案设计,常规基因工程实验操作,重组蛋白表达与纯化,重组抗体制备,天然蛋白分离与纯化,病毒分离培养等免疫学相关技术服务;同时我们也为工业客户提供部分IVD级别抗体和抗原原料。核心平台:---噬菌体抗体展示技术平台苏州蚂蚁淘生物科技有限公司利用自有的噬菌体(M13,T7噬菌体)展示技术平台,能够为客户提供极具性价比的重组Vhh抗体(纳米抗体/驼类纳米抗体)制备方案,包括动物免疫,文库建立,文库筛选以及重组抗体的体外表达等。---抗体工程技术平台卡梅德生物科技的抗体工程平台包含单克隆抗体制备服务平台,多克隆抗体制备服务平台,抗体测序与改造平台。单克隆抗体制备平台:基于杂交瘤技术的小鼠单抗技术平台,最快能够在2-3个月获得高亲和力与高特异性的单克隆抗体,同时基于噬菌体展示技术,我司能够制备多物种的重组单克隆抗体,包括小鼠,兔子,骆驼,羊驼以及人单抗。多克隆抗体制备服务平台:能够为客户提供兔多抗,羊多抗,骆驼类多抗,牛多抗等多物种的抗体制备服务,根据不同的抗原类型,来自蚂蚁淘生物的资深抗体专家会为您量身定做适合您需求的方案,以满足您的项目要求并节省您的宝贵时间。抗体一级序列测序平台:为满足大量客户对抗体基因序列与氨基酸序列信息的需求,我们为客户提供De Novo抗体全长氨基酸序列解析和N端测序服务;同时我们设计积累多达80种杂交瘤抗体基因测序引物。抗体改造技术平台:蚂蚁淘生物技术的抗体改造平台包括嵌合抗体制备,抗体亲和力成熟以及抗体人源化服务。目前我们已经成功制备十几例嵌合抗体与人源化抗体,均成功交付。---蛋白表达与纯化服务技术平台蚂蚁淘生物科技目前拥有四大蛋白表达平台,能为客户提供全面且优质的蛋白表达技术服务。哺乳动物表达平台:目前公司拥有Freestyle CHO,Expi CHO,CHO-DG44,HEK293F,Vero等细胞系用于蛋白表达制备。公司秉承质量优先原则,全部统一采用Gibco细胞培养基和相关转染配套试剂,以保证每个批次的哺乳动物细胞蛋白表达产品高质量、高表达水平的交付。同时公司拥有的表达载体体系,远高于市面常用蛋白表达载体,能够为客户提供高纯度蛋白。昆虫细胞表达平台:目前公司常采用的昆虫表达细胞为SF9,配套使用的是来自Gibco的培养基,只...


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