Life细胞凋亡产品(一) 自主发布资讯生物在线

LifeTechnologies提供了用于细胞功能和健康检测的各种试剂。其中许多分析以荧光或比色法为基础，具有灵敏性、便利性和安全性。这些产品已经过多种仪器平台验证，包括显微镜、流式细胞仪、酶标仪和高内涵筛选，能够实现各种细胞功能的分析：
细胞活性和细胞毒性
细胞增殖和细胞周期
细胞凋亡
自噬
氧化应激
内吞作用和吞噬作用
细胞内离子

   本文为大家介绍细胞凋亡的产品。
   细胞凋亡(细胞程序性死亡)是细胞正常发育过程中，由遗传控制的细胞消亡现象。凋亡调控异常与许多疾病状态有关，例如阿尔茨海默病、中风以及癌症。区别于坏死细胞的是，凋亡细胞的形态学特征为核染色质固缩、细胞皱缩以及产生膜包裹凋亡小体。细胞凋亡的生物化学特征在于基因组的片段化及几种细胞蛋白的解离或降解。
   与细胞活性一样，无法通过任何单一参数来准确界定细胞彻底死亡；因而采用几种不同的方法研究细胞凋亡通常十分有利。候选抗肿瘤药物若无法诱导细胞凋亡，其临床功效通常较差，因此凋亡分析成为重要的高通量药物筛选工具。

1.1Annexin结合物
　　
　　高度荧光物质AnnexinV结合物提供快速且可信赖的检测方式，可用于检测细胞凋亡中间阶段指标物phosphatidylserine的胞外化。AnnexinV结合物可有效应用于流式细胞技术及共轭焦或荧光显微技术(图1)，也能与其他染料或抗体共同使用，以便针对凋亡与非凋亡细胞的混合群体进行正确评定。LifeTechnologies提供超过10种与荧光染料结合的AnnexinV，能让研究人员在单一实验中完成多种参数的检测。

图1.以流式细胞技术分析Jurkat细胞的细胞凋亡情况。(A)Jurkat细胞以10μM喜树碱处理4h，再以AlexaFluor?488-AnnexinV辨识凋亡细胞、以SYTOX?AADvanced?辨识死细胞。凋亡细胞可通过强烈的AlexaFluor?488-AnnexinV荧光及微弱的SYTOX?AADvanced?加以辨识。L=活细胞、A=凋亡细胞、D=死细胞。(B)Jurkat细胞以1μM喜树碱处理。胞外化的phosphatidylserine以AlexaFluor?488-AnnexinV进行检测，凋亡晚期细胞及坏死细胞以PI染色。

产品列表

货号	产品名称	Ex/Em	规格
A23202	AnnexinV,AlexaFluor?350conjugate	346/442	500μl
A35122	AnnexinV,PacificBlue?conjugate	410/455	500μl
A13201	AnnexinV,AlexaFluor?488conjugate	495/519	500μl
A13199	AnnexinV,FITCconjugate	495/518	500μl
A35108	AnnexinV,AlexaFluor?555conjugate	555/565	500μl
A13202	AnnexinV,AlexaFluor?568conjugate	578/603	500μl
A13203	AnnexinV,AlexaFluor?594conjugate	590/617	500μl
A23204	AnnexinV,AlexaFluor?647conjugate	650/665	500μl
A35109	AnnexinV,AlexaFluor?680conjugate	679/702	500μl
A35111	AnnexinV,PEconjugate496,546,	656/578	250μl
A35110	AnnexinV,APCconjugate	650/660	250μl
A13204	AnnexinV,biotin-Xconjugate	NA	500μl
V13240	Single-ChannelDeadCellApoptosisKitwithAnnexinVAlexaFluor?488andSYTOX?GreenDyes		1kit
V13241	DeadCellApoptosisKitwithAnnexinVAlexaFluor?488&PI		50assays
V13242	DeadCellApoptosisKitwithAnnexinVFITCandPI		1kit
V13243	Vybrant?ApoptosisAssayKit#4,YO-PRO?-1/PropidiumIodide		200assays
V35112	DeadCellApoptosisKitwithAnnexinVPEandSYTOX?Green		1kit
V35113	DeadCellApoptosisKitwithAnnexinVAPCandSYTOX?Green		1kit
V35114	MetabolicActivityDeadCellApoptosisKitwithC12Resazurin,AnnexinVAPC,andSYTOX?Green		1kit
V35116	MitochondrialMembranePotentialApoptosisKit,withMitotracker?Red&AnnexinVAlexaFluor?488		1kit
A35136	PacificBlue?AnnexinV/SYTOX?AADvanced?ApoptosisKit		1kit
V35123

1.2单体花青素染料
在有些情况下，以AnnexinV染色并非检测细胞凋亡的最佳方法，如细胞对于AnnexinV所需的高钙离子浓度具高敏感性的实验、贴壁细胞的phosphatidylserine检测会遭受胰蛋白酶消化的不良影响的实验、限制不得冲洗样本的实验等。
LifeTechnologies提供的PO-PRO?-1、YO-PRO?-1及TO-PRO?-3三种单体花青素染料,可通过因细胞膜对称性丧失造成的膜通透性改变而穿透凋亡细胞。这些染料进入凋亡的细胞后会与核酸结合，而无法穿透的活细胞则可因此被排除。这三种染料具有独特的激发光波长，能在多重分析实验中提供高度灵活性。

图2.多色荧光分析黄麂成纤维细胞。使用蓝色荧光的AlexaFluor?350phalloidinconjugate(A22281)染色actin骨架蛋白。线粒体经ATPSynthaseSubunitIF1Mousemonoclonalantibody和绿色荧光的AlexaFluor?500goatanti-mouseIgG染色。细胞核以TO-PRO?-3(红色)染色。

货号	产品名称	细胞类型	Ex/Em	规格
P3581	PO-PRO?-1Iodide	活细胞	435/455	1ml
Y3601	YOYO?-1Iodide	活细胞	491/509	200μl
T3605	TO-PRO?-3Iodide	活细胞	642/661	1ml
V35123	MembranePermeABIlityDeadCellApoptosisKitwithPO-PRO?-1and7-AminoactinomycinD			1kit

1.3紫色膜不对称性比率探针/死细胞凋亡试剂盒
VioletRatiometricMembraneAsymmetryProbe/DeadCellApoptosisKit(A35137)提供了一种利用紫色激光流式细胞仪简单高效地检测细胞凋亡与细胞死亡的方法(图3)。紫色膜不对称性比率探针可检测凋亡过程中细胞膜的不对称性变化。它用于贴壁细胞和悬浮细胞均可获得极佳的性能，且可与其他凋亡指示剂(如caspase检测和线粒体膜电位改变)相关联。
该染料能产生激发态分子内质子迁移(ESIPT)效应，产生波长为530nm和585nm的双发射光谱，可对表面电荷的变化产生双重颜色比率的响应。F2N12S探针与SYTOX?AADvanced?死细胞染料结合，该染料仅能穿过晚期凋亡细胞或坏死细胞的细胞膜，从而将其与早期凋亡细胞区分开来。
与基于Annexin的分析不同，该分析方法无需特殊的缓冲液或冲洗步骤，而且在对贴壁细胞分析时，它不易出现物理或化学清除步骤中常见的细胞膜损伤，从而可以提供更佳的数据质量。

图3.紫色膜不对称性比率探针用于凋亡检测。Jurkat细胞用10μM喜树碱处理4小时(B和D)或不处理(A和C)用作对照。在流式细胞仪上分析样本，对F2N12S和SYTOX?AADvanced?死细胞染料分别采用405nm激发光和488nm激发光。通过F2N12S两种发射光的相对强度把活细胞与凋亡细胞和死细胞区分开来(A和B)。在C和D中，以SYTOX?AADvanced?死细胞荧光染色对F2N12S的两种发射光(585/530nm)的比值作图。A=凋亡细胞，L=活细胞，D=死细胞。

货号	产品名称	Ex/Em	规格
A35137	AnnexinV,AlexaFluor?350conjugate	405/585(Live)	100sts
		405/530(apoptotic)
		546/647(dead)sts

2.1膜电位——可固定探针 MitoTracker?染料为依赖细胞膜电位的探针，可针对红细胞中的线粒体进行染色。与膜去极化的线粒体相比，MitoTracker?染料在正常运作的线粒体中会产生较强的荧光信号，因此可用于辨识细胞群体中的健康细胞。即便经过后续的免疫细胞化学、DNA末端标记、原位杂交或复染后，MitoTracker?的染色结果仍能保持不变。MitoTracker?RedCMXRos(图4)与绿色荧光染料共用时，呈现极低的光谱重叠，而MitoTracker?OrangeCMTMRos则能与远红荧光染料共用。MitoTracker?RedCM-H2Xros及MitoTracker?OrangeCM-H2TMRos为需极低荧光背景的实验的最佳选择。
	图4.以MitoTracker?RedCMXRos分析线粒体膜电位。取自牛肺动脉的内皮活细胞同时以50nMLysoTracker?Blue-WhiteDPX、Dapoxyl?衍生物及100nMMitoTracker?RedCMXRos进行染色。
2.2膜电位——不可固定探针该类染料能针对细胞凋亡时的线粒体膜电位丧失提供快速、简单且可靠的检测。 1.JC-1为阳离子染料，在线粒体中会依据电位而累积，放射出的荧光会因此由绿色(~525nm)位移至红色(~590nm)，可有效应用于比例测量(图5和6) 2.MitoProbe?DilC1(5)及MitoProbe?DiOC2(3)AssayKit包含carbocyanine染料，可用于测定线粒体膜电位。前者可由红光激发，后者可由蓝光激发。 3.Rhodamine123及dihydrorhodamine123可轻易地经运行中的线粒体隔离，而不会导致细胞毒性。这类Rhodamine染料能快速吸收并达到平衡——仅需数分钟的时间，相比之下，其他膜电位敏感染料则需30分钟以上。 4.Tetramethylrhodamine的甲基酯及乙基酯(分别为TMRM及TMRE)可有效用于包含绿色荧光染料的多重颜色应用方法。
	图5.以JC-1分析线粒体膜电位。NIH/3T3小鼠纤维母细胞以JC-1染色，再用过氧化氢处理。以渐进式图像显示相同图像视野下的细胞在H2O2处理前后的情形，红色的聚合荧光减少，而绿色单体荧光则在细胞质中扩散。

图6.以MitoProbe?JC-1AssayKit(M34152)针对Jurkat细胞进行流式分析。Jurkat细胞以2μMJC-1于37℃、5%CO2之下染色15分钟，再以PBS冲洗，在流式细胞仪中分析。(A)未处理的细胞。(B)在37℃下用10μM喜树碱处理4小时以诱导凋亡细胞。
2.3线粒体通透孔线粒体通透孔是由线粒体内外膜成分所构成的非特异性通道，参与了细胞凋亡及坏死时线粒体内成分的释放。MitoProbe?TransitionPoreAssayKit相比于仅依赖线粒体膜电位的实验方法而言，对于线粒体通透性通透孔的开启提供了更直接的测量方法。产品列表

货号	产品名称	应用	细胞类型	是否可固定	Ex/Em	规格
M7514	MitoTracker?Green	FMFCM;IF	活细胞	否	490/526	20×50μg
M7510	MitoTracker?OrangeCMTMRos	FCM;IF	活细胞	是	554/576	20×50μg
M7511	MitoTracker?OrangeCM-H2TMRos	FCM;IF	活细胞	是	554/576	20×50μg
M7512	MitoTracker?RedCMXRos	FCM;IF	活细胞	是	579/599	20×50μg
M7513	MitoTracker?RedCM-H2Xros	FCM;IF	活细胞	是	579/599	20×50μg
T3168	JC-1	FCM;IF	活细胞	否	514/529	5mg
M34150	MitoProbe?DiOC2(3)AssayKit	FCM	活细胞	否	482/497	1kit
M34151	MitoProbe?DiIC1(5)AssayKit	FCM	活细胞	否	638/658	1kit
M34152	MitoProbe?JC-1AssayKit	FCM	活细胞	否	514/529	1kit
T668	Tetramethylrhodamine,MethylEster,Perchlorate(TMRM)	FCM;IF	活细胞	否	549/573	25mg
T669	Tetramethylrhodamine,EthylEster,Perchlorate(TMRE)	FCM;IF	活细胞	否	549/574	25mg
D23806	Dihydrorhodamine123	FCM;IF	活细胞	否	507/529	1ml
M34153	MitoProbe?TransitionPoreAssayKit	FCM	活细胞	否	494/517	1kit

FCM:FCM:flowcytometryIF:Immunofluorescence

阅读原文：http://www.liankebio.com/ProductCenterShow/articleID/2014030029.html

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