免疫佐剂百百种，挑选大哉问

免疫佐剂百百种，挑选大哉问
 
佐剂，英文为adjuvant，源自于拉丁文Adjuvare，意旨帮助。
 
佐剂主要功能为协助诱发、延长或增强对目标抗原产生特异性免疫反应。外来病原第一次进入动物内，首先遇到属先天免疫系统(InnateImmuneSystem)的抗原呈现细胞(Antigen-PresentingCell，APC)，经由巨噬细胞与树突细胞吞噬病原体、被感染的细胞或外来抗原，然后在抗原呈现细胞内进行分解，而将抗原片段呈现在细胞表面，并转移至淋巴结进而活化适应性免疫系统(AdaptiveImmuneSystem)的T淋巴细胞或B淋巴细胞，藉此产生具抗原特异性的细胞性免疫反应(CellularImmunity)或体液免疫反应(HumoralImmunity)，并产生记忆作用，使第二次反应会较第一次快且强。
 
理想的疫苗接种便是遵循这些步骤，利用完整病原体或片段，诱发有力且适合消灭病原体的特异性免疫反应，并产生免疫记忆。一般来说，传统减毒疫苗(AttenuatedVaccine)中已存在具有佐剂作用的成分，例如脂质、细胞膜成分等，可直接诱发出具长期保护性的免疫反应，不需额外添加佐剂；然而，不活化疫苗(Inactivated Vaccine)和次单位疫苗(Subunit Vaccine)，因不含有佐剂作用的成分，则可能需要添加佐剂，方能获得较理想的免疫效果。
 
 
常用免疫佐剂比较表：

	铝盐类佐剂	佛氏佐剂	ImmunoFast强化免疫佐剂
型态	不溶性胶状沉淀物	油质状或油水混和	水乳状
应用	用于人与动物用疫苗	用于兔子与老鼠等试验动物	用于兔子、老鼠、鸟禽等试验动物
免疫增强原理	铝盐是氢氧化 铝与磷酸铝等 无机物的通称 。依靠静电相互作用、免疫抗原得以与铝胶微粒相结合，并在注射部位形成短期堆积，再逐渐释放抗原，以发挥免疫提升效力。	弗氏佐剂分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。不完全弗氏佐剂是矿物油与羊毛脂混合而成，。不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂（FCA）。抗原被油性佐剂包覆不会快速免疫细胞吞噬，可以持续免疫反应的时间。	ImmunoFast是一种新型态的水性乳化佐剂，以连续的水相去包住微小的油滴，乳化后形成油包水，水包油的三层状态，易于在动物体内扩散，逐渐释放抗原，延长免疫时间。
优点	铝盐是最 广为使用的一种佐剂，常用于人体疫苗佐剂，对人类的安全性较高。	价格较低，容易取得。	粘度低，容易注射 水包油的三层状态，易于在动物体内扩散，不会因注射方式不正确造成肉芽囊肿产生或是诱导不良反应导致实验动物死亡。 特别适合搭配小分子抗原(10~20kDa)进行动物免疫。
缺点	因为免疫效果较为温和，添加铝盐佐剂的疫苗或抗原需接种两次以上才能诱导出有效的免疫力。	粘度高，不易于在动物体内扩散，易导致肉芽囊肿(Granuloma)形成而造成抗体生成量降低或是诱导不良反应导致实验动物死亡。	因为不容易制造而生产成本较高。

 
 
 
ImmunoFast^TMAdjuvant为VisualProtein品牌所开发新一代的佐剂，高亲水性的乳化型免疫用佐剂，样品蛋白质只需短短5分钟即可形成乳化状态。ImmunoFast佐剂可以有效增加免疫反应，减少珍贵抗原的使用量。
 
ImmunoFast^TMAdjuvant优势和特色如下：


图1：快速诱导免疫反应并产生高效价抗体。
ImmunoFast佐剂比传统的Freund’sAdjuvant能够更快速产生免疫反应。传统的Freund’sAdjuvant免疫小鼠后必须在第二次免疫之后才有很明显的抗体产生，而使用ImmunoFast佐剂可以在第一次免疫后就可以快速产生抗体，且在第二次免疫后仍可以产生比Freund’sAdjuvant更高效价抗体。
 
 




图2：有效提升抗体生产。ImmunoFast佐剂比传统的Freund’sAdjuvant能够更能引发免疫反应。比较首次免疫后的第二周与第六周的IgG抗体效价，可知ImmunoFast佐剂可以引发较强烈的免疫反应。





 

 图3：有效提高IgG 表现量。使用ImmunoFast佐剂免疫之后，在第一次免疫时产生IgM，而在第二次免疫之后，抗体几乎转变为IgG而IgM抗体浓度产生极低，换句话说，ImmunoFast快速佐剂可以快速将抗体转变由IgM转变成IgG，提高高专一性IgG抗体。

 
图4:进行抗原混合时，会使用塑料针筒和三向阀帮助混合，但一般所使用Freund’sadjuvant 非亲水性强导致塑料针筒在混合过程中被溶解，造成混合失败；而ImmunoFast^TMAdjuvant因亲水性较强，不会造成塑料针筒被溶解且样品蛋白质只需短短5分钟形成乳化状态，不会发生爆针现象。
 
 
三、配置方法
使用针筒和三向阀进行佐剂和抗原混合。
1.将适量抗原用PBS进行稀释，直到体积为180uL。
2.将20uLReagentI加入至抗原内。
3.将180uLReagentII至混合液体内。
4.准备好两支1mLTerumo针筒及一个三向阀，并先将其中一支针筒装在三向阀上。
2.针筒使用前先抽吸几次保持顺畅，避免佐剂和抗原堵住出针筒。
4.将抗原和佐剂混合物吸入另一支针筒内，并排除多余的空气后装置于三向阀上。
5.将三向阀开关转至针筒相通方向，双向互推直到呈白色乳化状态，形成乳化状态后再继续混合5分钟即可。