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VitaNaviX品牌 历史介绍:苏州蚂蚁淘生物科技有限公司，作为一家生命科学领域的高科技生物公司，目前代理销售二十多家欧美著名生物技术公司的产品，覆盖了免疫学、细胞生物学、分子生物学、药物筛选、生物制药、食品检测、疫苗生产等领域。
鸽肉含有多种氨基酸、维生素及微量元素；鸽蛋也是养生、滋补的佳品。随着国内外鸽子市场消费水平的增长，越来越多的商家投入到鸽子生产中，鸽子的繁育和发展受到了更多的关注。鸽子属于单态性鸟类，即雌雄性别在外观上表现一致。鸽子还是典型的“一夫一妻”制的繁殖方式，如果性别比例不当，不仅会使鸽群不安定，还会影响繁殖，降低产蛋率，所以雌雄鉴别在鸽子养殖业中具有重要作用。
鸽子作为晚成鸟，雏鸽体型小且雌雄外貌形态差别甚微，不像一般家禽可以从外形上区分雌雄。因此，人们对鸽子的雌雄鉴定主要依赖分子生物学方法，而其中CHD-W基因鉴定法最为常用。CHD1(chromo-helicase-DNA binding protein-1)在非平胸鸟类的Z、W染色体都有分布，两者的外显子序列和大小相似，内含子大小却有很大差别。国内外学者根据这个特性，利用内含子两侧保守序列设计特异性引物，使用PCR方法对CHD-W进行扩增，用于多种非平胸目鸟的性别鉴定，并取得了显著进展。
然而，一方面现有的引物主要针对普遍的非平胸目鸟类，与特定鸟类的基因吻合度低，PCR效果较差；另一方面现有的引物扩增雌性两条带大小差别不大，不易区分，容易造成判断失误；而且，在鸽子基因组DNA的提取过程费时费力，还容易造成样品污染，影响检测结果。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是提供一种技术实用性强、重复性好、效率高的直接对血液扩增鉴定鸽子性别的方法。该方法既可节约鸽子基因组DNA提取的成本，降低样本污染的风险和假阳性的概率，又可以用于鉴别外观上难以区分性别的鸽子的性别鉴定。
本发明的目的之一是提供一种鉴定鸽子性别的引物对。该引物对为：
上游引物CHd-WL1(SEQ ID NO：1，5’CTCTGGGTTTTGACCAACTA3’)；
下游引物CHd-WR1(SEQ ID NO：2，5’ATATCTTACCGCCTGATCTC3’)。
本发明的目的之二是提供一种鉴定鸽子性别的PCR试剂盒。该试剂盒包括：所述引物对SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2、LA PCR buffer、dNTPs、PEC-1和Omni Klentaq。
最后，本发明的目的提供一种鉴定鸽子性别的方法。具体步骤如下：对NCBI数据库中公布的多种鸟类CHD1序列进行比对，确定较为保守的区域，设计一对原创性引物对，引物对名称为CHd-WL1(核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示)和CHd-WR1(核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示)，该引物与其他已报道的禽类性别鉴定的引物完全不同，可用于鸽子性别的分子鉴定。采集鸽子翅静脉的新鲜血液或者抗凝管(EDTA)收集的冻存血，利用该引物对进行PCR扩增，PCR产物经1.5％的琼脂糖凝胶电泳进行检测。电泳后扩增产物为单一条带，可以判定该个体为雌性；电泳后扩增产物无条带，可以判定该个体为雄性。
与现有技术相比，本发明直接使用鸽子血液进行PCR检测，不仅节省了成本和劳动时间，还降低了样本污染的风险和假阳性的概率；在保守区域设计引物用于鸽子性别的鉴定，PCR扩增效果好，电泳检测条带清晰，结果易读，可以准确地判定鸽子性别；本发明设计引物通用性强，适用于鸽子品种包括但不限于白卡鸽、白王鸽、深王鸽、泰森鸽、银王鸽等。本发明使用血液直扩鉴定鸽子性别，是一种技术实用性强、重复性好、效率高的的方法。
附图说明
图1实施例中鸽子血液直接PCR产物电泳后的图谱；其中电泳图谱第一行：白卡1-8为白卡鸽，深王1-8为深王鸽，白王1-8为白王鸽；电泳图谱第二行：银王1-8号为银王鸽，泰森1-8为泰森鸽，B为空白对照。图中M为marker，♀为雌性，♂为雄性。
具体实施方式
下面参考具体实施例，对本发明进行说明，需要说明的是，这些实施例仅仅是说明性的，而不能理解为对本发明的限制。
若未特别指明，实施例中所采用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，可以参照《分子克隆实验指南》(J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译，第三版，科学出版社)或者相关产品进行，所采用的试剂和产品也均为可商业获得的。未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法，所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。
实施例
1、鸽子血液采集
本发明的样品来源于鸽子5个品种：白卡鸽、白王鸽、深王鸽、泰森鸽、银王鸽，每个 品种雌雄各4只。先将鸽子侧卧保定，露出腋窝处，拔去该部羽毛，可见翼下静脉，压迫翼下静脉的近心端，使血管怒张，消毒后，手持采血针由翼根向翅膀方向沿静脉平行刺入，采完后要压迫止血。采集的血液可直接检测或者抗凝管(EDTA)收集-20℃冷冻保存。
2、引物设计
对NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)数据库中公布的多种鸟类CHD1序列进行比对，确定保守的区域，利用primer5.0设计一对原创性引物对：CHd-WL1(核苷酸序列SEQ ID NO：1 CTCTGGGTTTTGACCAACTA)和CHd-WR1(核苷酸序列SEQ ID NO：2ATATCTTACCGCCTGATCTC)，该引物与其他已报道的禽类性别鉴定的引物完全不同，可用于鸽子性别的分子鉴定。
3、PCR扩增
20μl反应体系中加入鸽子血液0.8μl、LA PCR buffer 2μl、上下游引物各0.6μl、dNTPs 1μl、PEC-15μl、Omni Klentaq 0.3μl、ddH2O 9.7μl。其中：LA PCR buffer来自宝生物工程(大连)有限公司的10×LA Taq Buffer II(Mg2+plus)(Code No.9153A)，dNTPs购于宝生物工程(大连)有限公司(Code No.4030Q)，PEC-1增强剂购于VitaNavi Trchnology(VN260P)，Omni Klentaq直扩酶来自美国Enzymatics公司的Omni(P7500-HC-F)，ddH2O为高压灭菌的去离子水，引物由北京六合华大基因科技股份有限公司合成，工作浓度为10μM。表1是PCR的反应体系。
PCR反应条件为：98℃5min，35个循环：95℃30s，54℃30s，72℃45s，后72℃延伸5min，反应产物于4℃保存。
表1
4、性别鉴定
将PCR产物经1.5％的琼脂糖凝胶电泳进行检测。鸽子性别鉴定检测结果如图1所示：其中电泳图谱第一行：白卡1-8为白卡鸽，深王1-8为深王鸽，白王1-8为白王鸽；电泳图 谱第二行：银王1-8号为银王鸽，泰森1-8为泰森鸽，B为空白对照。图中M为marker，是天根生化科技(北京)有限公司的100bp DNA ladder，♀为雌性，♂为雄性。从扩增产物电泳图谱可知：扩增产物电泳为单一条带的是雌鸽，长度约370bp；扩增产物电泳无条带的是雄鸽。
5、序列分析
由于雄性鸽子不能扩增出目的条带，因此我们将经过鉴定的雌鸽样本的PCR扩增产物送华大基因测序，以验证性别鉴定的准确性。雌鸽样本的PCR扩增产物测序峰图使用Chromas软件查看，测序碱基序列结果使用DNAMAN软件查看，并使用DNAMAN软件将鸽子的测序碱基序列和NCBI数据库公布的多种鸟类的CHD1序列进行对比分析，结果显示扩增序列与参考序列有很高的一致性，说明我们扩增的序列为CHD1基因，进而说明我们设计的引物性别鉴定的结果是真实可靠的。
本发明方法技术实用性强，重复性好，效率高。直接使用鸽子血液进行PCR检测，不仅节省了成本和劳动时间，还降低了样本污染的风险和假阳性的概率。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
一步PCR——基因扩增技术的新革命
VitaNavi Technology公司?www.vitanavitech.com
?????? PCR技术已广泛应用于遗传病分子诊断、临床检验、动植物进出口检疫、食品安全监测、土壤微生物检测和亲子鉴定等众多领域。由于血液、食物、土壤等样本中含有大量抑制因子，如血红蛋白、高铁血红素、乳铁蛋白、腐植酸等，对常规Taq DNA聚合酶将产生明显的抑制作用。因此，必须先从这些待测样本分离提取核酸，然后用于PCR扩增。显然，传统方法操作步骤多、成本高、对样品的需要量较大且易于造成交叉污染。美国VitaNavi Technology 公司研发的新型高耐受性DNA聚合酶为基因检测技术带来了根本性的革新，彻底解决了依赖于纯化的核酸DNA为模板进行PCR扩增这一瓶颈问题。
???????VitaNaviTechnolog是总部在美国的一家专门从事Taq酶及其相关产品研发与销售的国际高科技生物公司。该公司生产的新一代突变的Taq和Klentaq酶可耐受反应中高浓度的抑制因子，具有内在热启动特性，不需抗体或化学修饰。生产的PCR增强剂可改善PCR的结果, 从GC含量>80% 的样品中成功扩增目的基因。 该公司产品被广泛应用于临床诊断，法医鉴定，动、植物检疫，食品及环境监测，畅销全球40多个国家和地区，是目前国际上生产PCR聚合酶的主要供应商之一。
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????? 2012年12月VitaNavi Tech公司授权“深圳市盎然生物科技有限公司”为其在中国大陆及香港地区的合法代理商，经营所有VitaNavi Tech公司的产品。
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核心产品介绍：
?????? VitaNavi Tech公司的核心产品是一类经基因工程改造的Taq DNA聚合酶，主要有Klentaq、Omni Taq、Omni Klentaq、Cesium Taq或Cesium Klentaq等，每一种聚合酶包括常规和LA（long accurate）两种类型。Klentaq是缺失了N端278个氨基酸的Taq酶，与野生型Taq酶相比，截短的Klentaq酶具有更高的保真性和热稳定性；Omni 酶是从文库中筛选出来的具有极高耐受性的Taq或者Klentaq突变体，可以直接以全血、血清、土壤、牛奶、巧克力或奶酪等材料为模板一步扩增目的基因，避免了繁琐的核酸DNA提取过程；Cesium酶是筛选出来的另一种聚合酶突变体，其特征是在常温下活性很低，而当温度达到68℃以上时，Taq酶的活性得到完全恢复，因此，Cesium酶具有天然的热启动（Hot start）特性。
VitaNavi Technology产品选购
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| Taq Enzymes | Hot Start |
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Long & Accurate |
5X PCR Kit Available |
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| Omni Klentaq | + | ++ | ? | ? | ? | + |
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| CesiumTaq LA | ++ | ? | ? | ? | + | + |
| Cesium Klentaq AC | ++ | ? | ? | ? | ? | + |
| Cesium Klentaq AC LA | ++ | ? | ? | ? | + | + |
| Cesium Klentaq C | ++ | ? | ? | ? | ? | + |
| Cesium Klentaq C LA | ++ | ? | ? | ? | + | + |
| Solo Taq | ? | +++ | ? | ? | ? | + |
| Solo Taq LA | ? | +++ | ? | ? | + | + |
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为满足集团公司优质客户的广泛生物材料使用需求，公司长期以来提供国际小众品牌的代采购增值服务。经过多年的经验积累和客户反馈，已经建立了成熟完善的国际采购业务平台，美东美西两大合作集货点，自有快速审批和进出口通道。现将此服务开放给广大经销商合作伙伴和全国科研工作者，致力于缩短中国与国际一线研发的差距。
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H：hellobio、HENKE-SASS WOLF、Higgins Analytical、HJ-BIOANALYTIK
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K：Kerafast、KOAMTAC
L：LAB BIO、LC Labs、LigaTrap、Lighthouse data、LP ITALIANA、Lumafluor、LYTIC SOLUTIONS
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N：Neuro Prob、NextGene、nippongenetics、NORTHWEST ANALYTICS、NovaBioAssays、NU-CHEK PREP
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S：SRL、SPD Scientific、Sanquin、Sbio、Scarab Genomics、Simport、SOVICELL、Starna cells
T：TSC、Tower optical corporation、TwistDx、TEKnova、Transposagen、Tribioscience、TriLink
U：Ultivue
X：ximbio
Z：Zymesci
细胞：Riken、JCRB Cell Bank、Kerafast、
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（此处以Amsbio为例，实际不同品牌不同产品类型所涉及流程稍有不同）
1. 本公司并非以上各个品牌在中国区代理商，仅提供产品代理采购业务。
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依托于集团公司深厚的资源和超过400家国内优质客户群体，生命科学领域一站式供应链体系，以及高风险生物材料进出口平台的优势，蚂蚁淘生物严格筛选国际创新且经过同行验证过的产品和技术，引入中国市场，开发、孵育和推广。
自公司成立以来，与海外一线品牌建立了长期的交流与合作关系，其中包括多家国际著名细胞和菌种保藏中心。仅2019年内，蚂蚁淘生物接受国内制药企业、科研机构、检测机构和大专院校等单位的委托，从近150个品牌引进各类生物试剂，其中不乏包括细胞株 ，慢病毒，人体组织切片，血液制品等特种试剂。公司与北京中关村联合创新（绿通北平台）建立了长期的交流与合作关系，可为国内客户提供进口代理业务，完成一站式前置审批、风险评估、检疫审批、清关查验、物流仓储等工作。
本公司特殊物品进口业务，严格遵守国家相关政策和法规流程，致力于为各单位提供更安全、更专业、更便捷的服务。