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biossusa的ACE2(血管紧张素I转换酶2)是一种蛋白质编码基因。与ACE2相关的疾病包括严重急性呼吸系统综合症和神经性高血压。该基因编码的蛋白属于二肽基羧二肽酶的血管紧张素转化酶家族,与人类血管紧张素1转化酶具有相当的同源性。这种分泌的蛋白质催化血管紧张素I裂解为血管紧张素1-9,而血管紧张素II裂解为血管扩张剂血管紧张素1-7。
蛋白质印迹是蛋白质检测和定量的黄金标准,因此广泛用于生物学研究。鉴于一蛋白质印迹法由多个步骤组成,过程中的任何潜在变化(例如样品制备,样品加载或蛋白质转移到膜等)都可能导致截然不同的结论。为了避免由潜在的性能差异引起的误解,在任何蛋白质印迹测定中必须建立适当的上样对照。
蛋白质印迹的最常见应用可能是研究生物学样品中蛋白质丰度的变化。对照蛋白和实验蛋白的抗体被应用于同一印迹,并且来自加载控件将用于归一化目标蛋白的信号。因此,理想的上样控制应该是在目标样品中以稳定水平表达的蛋白质。由于这个原因,被普遍表达且对于基本细胞功能必需的管家蛋白,例如细胞骨架蛋白,被认为是出色的上样对照,并被广泛使用。然而,细胞骨架蛋白被无差别地用作“通用”的加载控制。已经表明,尽管细胞骨架蛋白在细胞中组成性表达,但它们的表达水平可响应于特定的实验条件而变化。
而不是随机选择 β-肌动蛋白 要么 α-管蛋白作为上样对照,仔细寻找合适的对照蛋白不仅是关键的关键因素,而且对于特定的蛋白质印迹而言也至关重要。甲各种不同的蛋白质的可在特定的实验中为用作上样对照,只要它们的表达水平是稳定的,相对独立的用在感兴趣样品实验蛋白质表达。为了使选择更加简单,我们在此列出研究人员的一般注意事项。下一个博客将讨论针对特定实验的更详细标准。
要考虑的一般标准:
稳定的表达:与总蛋白相比,上样对照的蛋白水平应保持恒定,并且不受测试变量(例如化验处理或发育阶段)的影响,
检测大小:上样对照的分子量应与目标蛋白质的分子量实质不同。
表达水平:选择一个在目的样品中表现出强表达的上样对照。
丰度可比性:对照蛋白质的丰度应与样品中目标蛋白质的丰度相当。即,该方案和检测方法可以揭示上样对照和目的蛋白水平的变化,而不会产生信号饱和。(如果上样对照的表达水平大大高于目的蛋白的表达水平,则必须进行专门用于连续稀释的蛋白对照的蛋白质印迹,以确定上样对照的检测范围。)

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