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DownloadNucViewdyeflyer在活细胞中检测Caspase-3并染色细胞核DNA直接加入细胞培液,孵育15-30分钟后即可检测，无需清洗残余染料兼容使用荧光素滤光片的流式细胞仪和荧光显微镜。可固定染色图1.Staurosporine诱导的MDA-MB-231细胞在37℃下用1M的DEVD-NucView488Caspase-3底物孵育30分钟后用通常的3.7%甲醛固定。固定后的细胞破膜并用sulforhodamine101-phalloidin（TexasRed-phalloidin）（#00033）染色。调亡细胞的细胞核DNA被酶反应释放的DNA染料染成绿色，同时细胞骨架被F-actin结合的phalloidin染成红色。
DEVD-NucView488Caspase-3底物是Biotium公司开发的一系列在活细胞内实时检测Caspase活性的NucViewCaspase底物中的第一个产品。不同于传统的caspase酶检测方法，Biotium公司发明了一种创新的荧光底物设计技术，将底物的一部分连接到功能性染料上，从而使这些染料失去功能。利用这种方法设计的荧光底物在酶切之后，染料能被释放出来恢复功能并能结合目标分子释放荧光（图2）。
对于DEVD-NucView488Caspase-3底物，Biotium将一段带有大量负电荷的DEVD肽连接到一种和DNA结合的染料上。这些负电荷使得该染料不能结合DNA，也就不能产生荧光（图6）。这种底物可以快速的穿过细胞膜进入细胞质并在这里被Caspase-3剪切，从而释放出和DNA有高亲和力的染料。释放出来的染料可以迁移进入细胞核并把细胞核染成亮绿色（图1）。因此，这种双功能底物让研究人员在凋亡细胞内检测Caspase-3活性的同时染色细胞核，显示细胞核在凋亡过程中经历的形态学变化。在众多凋亡的细胞内，不同细胞可能处在不同时期并经历着凋亡过程中的不同事件，因而研究中很
重要的一点就是能实时独立的跟踪这些事件，从而更好的了解事件之间的相互关系。DEVD-NucView488Caspase-3底物结合Biotium公司开发的其他荧光探针，是通过荧光显微镜和/或者流式细胞仪来研究这些不同事件的时间、空间关系的强有力工具（图4）。
图2.模式图显示了NucView荧光底物检测细胞内Caspase活性的原理。Biotium公司现提供两种活细胞Caspase-3检测试剂盒。产品＃30029包含DEVD-NucView488Caspase-3底物和Caspase-3抑制剂，足够在流式细胞仪或荧光显微镜上进行至少100次实验。产品＃30030是一种双凋亡检测方法试剂盒，包含DEVD-NucView488Caspase-3底物和用来检测磷酸化丝氨酸（PS）转位的红色荧光sulforhodamine101-annexinV，足够在流式细胞仪或荧光显微镜上进行至少50次实验。使用两种产品的具体实验步骤可以从Biotium网站上下载。