凡是市场上声称具有与Gelred和Gelgreen相同特性的EB替代品,且不指明是Biotium公司品牌的核酸染料,经检验都是通过Gelred或Gelgreen稀释后重新包装的水货,染色质量远不及Biotium原包装产品。我们鄙视这种损害客户利益的行为,并坚决打击,发现一次我们将不再向其供货!
在此,请广大客户认准正规购货途径,上海开放生物--Biotium中国总代理(OPE)(点击官方网站验证链接)。
由美国BIOTIUM公司技术专家研发的GelRed和GelGreen是两种集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成任何环境污染。(下载美国LitronLaboratories,Inc.完整安全检测报告)
虽然EB(溴化乙啶)作为目前使用最广泛的核酸凝胶染色试剂,能够在多数应用中提供可以接受的灵敏度,但它是一种高诱变性的化学物质。而且EB染色后具有较高的背景荧光信号(如图1)。
SYBRGreenI和SYBRGold也被厂家宣传为最灵敏的凝胶染色试剂。但SYBRGreenI尤其是SYBRGold在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解,稳定性差导致染色效果极不可靠。
SYBRsafe被认为是市场上较为安全的核酸染料,但它的染色效果还远不及SYBRGreenI。
至于国内有公司宣称的新产品Goldview,我们不想多加评论。因为从极为相似的对比试验结果来看,该产品似乎就是AO(丫啶橙,一种剧毒产品,且荧光亮度不佳)。请看Goldview与AO对比试验结果(其中Goldview是从国内某公司采购,AO则来自SIGMA,报告来自开放生物)
Biotium公司的GelRed和GelGreen无论用于预制凝胶染色还是凝胶电泳后染色,都表现出了极高的灵敏度。为配合312nmUV凝胶成像系统而设计的GelRed,在使用了我们新开发的具有专利的试验步骤后(该试验步骤中使用稀释的NaCl溶液替代传统的TBE缓冲溶液),在凝胶电泳后染色中优于或者至少相当于SYBRGold。但与SYBRGold不同,GelRed在预制凝胶中使用时仍然有极高的灵敏度,事实上GelRed在检测低浓度、微量DNA方面比EB表现出更高的灵敏度,尤其对小分子量的DNA检测非常灵敏(图1)。GelGreen可以满足使用488nm激光凝胶扫描仪或者可见光激发的DarkReader的研究人员的使用要求。GelGreen无论是在预制凝胶还是凝胶电泳后染色中都与SYBRGreenI灵敏度相当,但不存在后者的不稳定性问题。实际上,GelRed和GelGreen,特别是GelRed非常稳定,可以长期在室温下保存。当这两种染料稀释在TBE或者类似的电泳缓冲溶液中时甚至可以使用微波炉加热,便于采用常规方法制备预制凝胶。含有染料的预制凝胶可以成批制备,长期保存。
同样重要的是,GelRed和GelGreen相比EB或SYBRGreenI提高了安全性。独立的测试服务公司(LitronLaboratories,Inc.)进行的标准艾姆斯氏测试结果表明,在18.5μg/mL(该浓度远高于推荐用于电泳后染色的约4μg/mL的3X染色液)浓度下,GelGreen没有诱变性,而GelRed也仅在S9代谢活化时有微弱的诱变性。GelRed和GelGreen的特殊化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞,正是这一特性降低了染料的细胞毒性。如图3。相反,SYBRGreenI广泛地用于活细胞线粒体和核DNA染色,这正是由于它能快速的被细胞吞入。由于已知SYBRGreenI对紫外线导致的突变有强烈的增强作用(Ohtaetal.Mutat.Res.492,91(2001)),因此它的高细胞膜透性使它在紫外环境观察时成为凝胶染色的主要有害物质。
安全性测试 SYBRDyesGelRedGelGreen A)5min.incubation要想让DNA染色剂安全,唯一的办法就是设法不让其穿透细胞膜进入活体细胞内,Biotium做到了!B)30minincubation图3.在37°C下,分别使用1XSYBRGreenI,SYBRSafe,GelRedandGelGreen对HeLa细胞进行孵化,并分别在5分钟(A)和30分钟(B)后观察。实验显示SYBR染料迅速进入细胞并将细胞内的核酸染成亮绿色(以上仅图示SYBRGreen1),而GelRed和GelGreen则因为不能穿透细胞膜而完全没有进入细胞内,足以证明GelRed和GelGreen是安全的。
图5.室温下,GelRedTM(500nm)和SYBRGold(488nm)稀释在1×TBE凝胶染色液中测得的吸光度随时间变化图。GelRed和SYBRGold初始的吸光度值分别为0.029和0.051。Biotium专利产品:
安全核酸染料GelRed/GelGreen; 饱和荧光定量HRM染料EvaGreen;
20种颜色305-770nm的近红外染料CF系列; 钙离子指示剂及各类衍生物;
生物膜及膜电位差荧光染料; NO、活性氧研究生化试剂;
生物酶底物/Thiol反应活性荧光染料; 生物素产品;胞质式踪染料;
神经式踪染料;蛋白研究试剂; EvaGreen荧光定量试剂盒;
NucView488-caspase3双功能细胞凋亡检测试剂盒;红色核复染剂RedDot;
MitoView633线粒体膜电位检测试剂盒; 细胞活力/毒力检测试剂盒;
混合即染--30min:一抗标记试剂盒; AccuBlue微量dsDNA定量试剂盒;
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