人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒

人可溶性肾素(前体)受体ELISA检测试剂盒
日本IBL原装进口，货号：27782
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简介
肾素受体(RR)是肾素和肾素前体的共同受体.当肾素与其受体结合后, 肾素作用于全身循环及局部组织中的血管紧张素,使其变成血管紧张素1,另外肾素受体受刺激后会激活细胞内的信号通道.
公认地对RR的研究对抑制过度活跃的肾素-血管紧缩素-醛固酮系统提供重要的研究方略.
(P)RR是一种分子量为39 kDa的单跨膜受体蛋白.据报道其中的29 kDa的可溶性片段是由于RR的裂解而产生的.因此定量的检测血液或尿液中的可溶性(P)RR可以作为检测发病新的辅助工具,作为解释其病理机制的新途径.
此ELSIA检测试剂盒可以定量检测人血液和尿液中的可溶性肾素(前体)受体。日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。
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实验原理日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。
此试剂盒基于酶免法的夹心原理，利用两种高特异性抗体，TMB作为显色剂，显色的强度与人肾素受体的量成正比
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检测范围日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。
125~8000pg/ml
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预期用途日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。
仅用于研究，不能用于诊断
此试剂盒可用于血清，EDTA-血浆，尿液和细胞培养上清液中人肾素受体的定量检测
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试剂盒组成日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。

1. 预包被板，抗人肾素受体兔IgG，亲和纯化            96孔
2. 标记抗体浓缩液，

30X，HRP标记抗人肾素受体（93A1B）小鼠IgGFab’   0.4mlx1

1. 标准品，重组人肾素受体                           0.5mlx2
2. EIA缓冲液，1%BSA，含0.05%吐温20的PBS        30mlx1
3. 标记抗体稀释液，1%BSA，含0.05%吐温20的PBS   12mlx1
4. 着色剂，TMB底物液                              15mlx1
5. 终止液，1N硫酸                                  12mlx1
6. 洗涤缓冲浓缩液,40X，含0.05%吐温20的磷酸缓冲液   50mlx1

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实验所需材料但试剂盒未提供日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。

1. 酶标仪
2. 微移液管和枪头
3. 烧杯
4. 去离子水
5. 冰箱（4℃）
6. 坐标纸
7. 吸水纸
8. 用于稀释标准品的试管
9. 洗瓶
10. 一次性试验管

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试剂准备日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。

1. 洗涤缓冲液制备：先将洗涤浓缩液平衡至室温，充分混匀，然后吸取50ml浓缩液与1950ml的去离子水混匀，即得。配制的洗涤液应保存于冰箱内，并于2周内用完
2. 标记抗体的制备：用标记抗体稀释液将标记抗体稀释30倍，即得。

如：如果只测一条板，8孔，则需要标记抗体800ul（30ul的标记抗体+870ul的标记抗体稀释液，混匀，使用时每孔加100ul）
此步骤在实验前完成
剩余的标记抗体浓缩应装于密封瓶内，保存在4℃

1. 标准品的制备：吸取0.5ml的去离子水至标准品瓶内，充分混匀，得到1600pg/ml的人肾素受体标准品
2. 标准品的稀释：准备8个试管用于标准品的稀释，每管加入230ul的EIA缓冲液

每管的浓度如下
1号管                 8000pg/ml
2号管                 4000 pg/ml
3号管                 2000 pg/ml
4号管                 1000 pg/ml
5号管                 500 pg/ml
6号管                 250 pg/ml
7号管                 125 pg/ml
8号管                 0ng/ml（试验样品空白）
吸取230ul的标准品于1号管混匀，然后从1号管吸取230ul加入2号管，依次连续稀释，标准品范围为8000~125 pg/ml

1. 样品稀释：样品用EIA缓冲液稀释。如果样品浓度未知，建议稀释几个不同比例的样品进行检测，来确定样品最佳稀释比例

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实验步骤日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。
使用前，所有样品应平衡至室温，大约30min，然后充分混匀，确保试剂质量无变化，标准曲线和样品检测同时进行

试剂	检测样品	标准品	检测样品对照孔	试剂对照孔
	检测样品100ul	稀释标准品（1-7管）100ul	EIA缓冲液（第8管）100ul	EIA缓冲液100ul
盖板，4℃下孵育过夜
洗板4次
酶标抗体	100ul	100ul	100ul	-
盖板，4℃下温育60min
洗板5次
显色剂	100ul	100ul	100ul	100ul
室温避光温育30min
终止液	100ul	100ul	100ul	100ul
加终止液后,30min内于酶标仪450nm处读取OD值

 

1. 确定试剂空白孔并加入100 μL  EIA缓冲液
2. 各加加100ul试验样品空白，样品和稀释的标准品至相应的孔内
3. 盖板，4℃下孵育过夜
4. 洗板，重复4次以上，吸水纸上拍干
5. 每孔加入100ul的标记抗体液，除试剂空白孔外
6. 盖板，4℃下孵育60min
7. 洗板5次，同步骤四
8. 吸取试验所需的TMB底物液于一次性试管内，每孔加入100ul的TMB底物液。剩余的TMB底物液不能再放回至原装瓶内
9. 黑暗处，室温下孵育30min，溶液变蓝
10. 每孔加入100ul的终止液，溶液变蓝
11. 擦去微孔板底部的污点或水滴，终止液加入后30min内，在酶标仪450nm处读数

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特别注意日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。

1. 试验样品采集后应立即检测或是冻存，冻存的样品避免反复冻融，检测前应在低温下先将其完全溶解混匀
2. 试验样品用EIA缓冲液稀释，
3. 试验样品和标准品应做双份检测
4. 试验样品应在中性PH范围，有机溶剂的污染可能会影响检测
5. 只能用试剂盒提供的洗涤液洗板，否则会导致试验失败
6. 吸水纸上拍干微孔板，不能擦拭
7. TMB底物液应贮存于黑暗处，因其对光敏感，且避免接触金属
8. 加入终止液后30min内必须酶标仪读数

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结果计算日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。
绘制曲线前，所有的数据都应减去试验样品空白值，包括标准品和未知的样品。以标准品的OD值和浓度在对数-对数坐标纸上绘制标准曲线，从标准曲线上可直接读取未知样品的浓度
 
附：采用全自动酶标仪检测，只需检测前设置好酶标仪的相关参数，如坐标参数（线性，半对数）和计算方式参数（三次回归、四参数或双对数曲线方程），即可直接得到结果
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本译文仅供参考，详情请以原文为准。
 
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