实验小达专业分享：InvivoGen 的 TLR9 激动剂 -- CpG ODNs

InvivoGen 的 CpG ODNs 优势

• 涵盖最全的 CpG 寡聚脱氧核苷酸（CpG ODN）或细菌 DNA
• 生物学活性检测
• 随产品提供去内毒素水
• 高溶解度

三个主要刺激性 CpG ODNs 的分类，是基于其结构特性以及 CpG ODNs 在人外周血单核细胞（PBMC）中对某些 B 细胞和 类浆树突细胞（pDC）的作用活性而划分的。三类 CpG ODNs 分别是 Class A (Type D), Class B (Type K) 和 Class C。
 
A、B、C 三类具体解析：

• CpG-A ODNs 以含有 CpG 回文序列为中心的 PO 骨架和 PS 修饰的 3』端 poly-G 链构成。CpG-A ODNs 可以刺激类浆树突细胞（pDC）产生较强的 IFN-a，但是会较弱的激活 TLR9 依赖的 NF-kB 信号通路，产生较少的促炎性细胞因子（如白细胞介素 6）。
• CpG-B ODNs 是包含一个或多个 CpG 二核苷酸的完整 PS 骨架结构序列。CpG-B ODNs 可以较强的活化 B 细胞和 TLR9 介导的 NF-kB 信号，但刺激分泌 IFN-a 的效果较弱。
• CpG-C ODNs 结构是 Class A 和 B 的混合体。它包含了完整的 PS 骨架和 CpG 回文序列。CpG-C ODNs 可以较强的引起 pDC 分泌 IFN-a，在刺激 B 细胞时也可以得到较好的效果。

InvivoGen 三类 CpG-ODNs 的应用案例分享

Class A 型

1. Class A (type D) CpG ODNs (CpG-A ODNs) 以含有 CpG 回文序列为中心的 PO 骨架和 PS 修饰的 3』端 poly-G 链构成。
2. Poly G 末端在分子间形成四分体，从而产生高分子量结构。这样的结构增强了稳定性与内涵体的胞内转运，促使大量 IFN-a 的产生和 pDCs 的成熟。
3. CpG-A ODNs 也是 NK 细胞的强活化剂，其作用是通过间接的细胞因子信号来达到活化效果。
4. 文献参考：Ballas ZK. et al., 1996. Induction of NK activity in murine and human cells by CpG motifs in oligodeoxynucleotides and bacterial DNA. J Immunol. 157(5):1840-5. Krug A. et al., 2001. Identification of CpG oligonucleotide sequences with high induction of IFN-alpha/beta in plasmacytoid dendritic cells. Eur J Immunol. 31(7):2154-63. Verthelyi D. et al., 2001. Human peripheral blood cells differentially recognize and respond to two distinct CPG  motifs. J Immunol. 166(4):2372-7.
用不同浓度的 A-class CpG ODNs, ODN 1585, ODN 2216 或 ODN 2236 及相应的对照 ODNs 刺激 HEK-Blue™ hTLR9 细胞
（表达人源 TLR9 和 NF-κB 诱导 SEAP 报告基因, 刺激物与 HEK-Blue Detection 试剂共孵育 24 小时, NF-ΚB-诱导 SEAP 的水平在 OD 655 nm 检测。
用不同浓度的 A-class CpG ODNs, ODN 1585, ODN 2216 或 ODN 2236 及相应的对照 ODNs 刺激 HEK-Blue™ mTLR9 细胞（表达鼠源 TLR9 和 NF-κB 诱导 SEAP 报告基因, 刺激物与 HEK-Blue Detection 试剂共孵育 24 小时, NF-ΚB-诱导 SEAP 的水平在 OD 655 nm 检测。

Class B 型

1.Class B (type K) CpG ODNs (CpG-B ODNs) 是 18-28 摩尔的线性脱氧寡核苷酸。CpG-B ODNs 是包含一个或多个 6 摩尔 CpG 二核苷酸的完整 PS 骨架结构序列。人源的最佳序列是 GTCGTT[1]，鼠源的最佳序列是 GACGTT[2]。
2. CpG-B ODNs 是 B 细胞和 NK 细胞的强刺激剂，对于 IFN-a 分泌的刺激效果却较弱 [3,4]。CpG-B ODNs 表现出较好的抗肿瘤效果以及 Th1 型佐剂的活性。
3. 文献参考：Hartmann G & Krieg AM., 2000. Mechanism and function of a newly identified CpG DNA motif in human primary B cells. J Immunol. 164(2):944-53. 2- Krieg AM. et al., 1995. CpG motifs in bacterial DNA trigger direct B-cell activation. Nature. 374(6522):546-9. 3- Hartmann G. et al., 2000. Delineation of a CpG phosphorothioate oligodeoxynucleotide for activating primate immune responses in vitro and in vivo. J Immunol. 164(3):1617-24. 4- Gürsel M. et al., 2002. Differential and competitive activation of human immune cells by distinct classes of CpG oligodeoxynucleotide. J Leukoc Biol. 71(5):813-20.
用不同浓度的 B-class CpG ODNs, ODN 1668, ODN 1826, ODN 2006 或 ODN 2007 及相应的对照 ODNs 刺激 HEK-Blue™ hTLR9 细胞（表达人源 TLR9 和 NF-κB 诱导 SEAP 报告基因, 刺激物与 HEK-Blue Detection 试剂共孵育 24 小时, NF-ΚB-诱导 SEAP 的水平在 OD 655 nm 检测。
用不同浓度的 B-class CpG ODNs, ODN 1668, ODN 1826, ODN 2006 或 ODN 2007 及相应的对照 ODNs 刺激 HEK-Blue™ mTLR9 细胞（表达鼠源 TLR9 和 NF-κB 诱导 SEAP 报告基因, 刺激物与 HEK-Blue Detection 试剂共孵育 24 小时, NF-ΚB-诱导 SEAP 的水平在 OD 655 nm 检测。

Class C 型

1. Class C CpG ODNs (CpG-C ODNs) 结构是 Class A 和 B 的混合体。它包含了完整的 PS 骨架和 CpG 回文序列。
2. C-Class CpG ODNs 可以较强的引起 pDC 分泌 IFN-a，在刺激 B 细胞时也可以得到较好的效果。C-Class CpG ODNs 是很强的 Th1-诱导性佐剂。
3. 文献参考：Vollmer J. et al., 2004. Characterization of three CpG oligodeoxynucleotide classes with distinct immunostimulatory activities. Eur J Immunol. 34(1):251-62.
 
用不同浓度的 C-class CpG ODNs, ODN 2395 或 ODN M362 及相应的对照 ODNs 刺激 HEK-Blue™ hTLR9 细胞（表达人源 TLR9 和 NF-κB 诱导 SEAP 报告基因, 刺激物与 HEK-Blue Detection 试剂共孵育 24 小时, NF-ΚB-诱导 SEAP 的水平在 OD 655 nm 检测。
用不同浓度的 C-class CpG ODNs, ODN 2395 或 ODN M362 及相应的对照 ODNs 刺激 HEK-Blue™ mTLR9 细胞（表达鼠源 TLR9 和 NF-κB 诱导 SEAP 报告基因, 刺激物与 HEK-Blue Detection 试剂共孵育 24 小时, NF-ΚB-诱导 SEAP 的水平在 OD 655 nm 检测。

小编教您如何正确选择 ODN 类型
InvivoGen ODN 的品质经专业的实验室检测，并发表文献。绿字部分：实验结果表明，从 InvivoGen 购买的 CpG-C，不同批次的产品刺激细胞并产生 IgG 的效果均一稳定，而从 Sigma 和 Coley 购买的产品活性则非常不稳定。