实验小达专业分享：InvivoGen 的 TLR9 激动剂 CpG ODNs

InvivoGen的CpGODNs优势

• 涵盖最全的CpG寡聚脱氧核苷酸（CpGODN）或细菌DNA
• 生物学活性检测
• 随产品提供去内毒素水
• 高溶解度

三个主要刺激性CpGODNs的分类，是基于其结构特性以及CpGODNs在人外周血单核细胞（PBMC）中对某些B细胞和类浆树突细胞（pDC）的作用活性而划分的。三类CpGODNs分别是ClassA(TypeD),ClassB(TypeK)和ClassC。
 
A、B、C三类具体解析：

• CpG-AODNs以含有CpG回文序列为中心的PO骨架和PS修饰的3』端poly-G链构成。CpG-AODNs可以刺激类浆树突细胞（pDC）产生较强的IFN-a，但是会较弱的激活TLR9依赖的NF-kB信号通路，产生较少的促炎性细胞因子（如白细胞介素6）。
• CpG-BODNs是包含一个或多个CpG二核苷酸的完整PS骨架结构序列。CpG-BODNs可以较强的活化B细胞和TLR9介导的NF-kB信号，但刺激分泌IFN-a的效果较弱。
• CpG-CODNs结构是ClassA和B的混合体。它包含了完整的PS骨架和CpG回文序列。CpG-CODNs可以较强的引起pDC分泌IFN-a，在刺激B细胞时也可以得到较好的效果。

InvivoGen三类CpG-ODNs的应用案例分享

ClassA型

1.ClassA(typeD)CpGODNs(CpG-AODNs)以含有CpG回文序列为中心的PO骨架和PS修饰的3』端poly-G链构成。
2.PolyG末端在分子间形成四分体，从而产生高分子量结构。这样的结构增强了稳定性与内涵体的胞内转运，促使大量IFN-a的产生和pDCs的成熟。
3.CpG-AODNs也是NK细胞的强活化剂，其作用是通过间接的细胞因子信号来达到活化效果。
4.文献参考：BallasZK.etal.,1996.InductionofNKactivityinmurineandhumancellsbyCpGmotifsinoligodeoxynucleotidesandbacterialDNA.JImmunol.157(5):1840-5.KrugA.etal.,2001.IdentificationofCpGoligonucleotidesequenceswithhighinductionofIFN-alpha/betainplasmacytoiddendriticcells.EurJImmunol.31(7):2154-63.VerthelyiD.etal.,2001.HumanperipheralbloodcellsdifferentiallyrecognizeandrespondtotwodistinctCPG motifs.JImmunol.166(4):2372-7.
用不同浓度的A-classCpGODNs,ODN1585,ODN2216或ODN2236及相应的对照ODNs刺激HEK-Blue™hTLR9细胞
（表达人源TLR9和NF-κB诱导SEAP报告基因,刺激物与HEK-BlueDetection试剂共孵育24小时,NF-ΚB-诱导SEAP的水平在OD655nm检测。
用不同浓度的A-classCpGODNs,ODN1585,ODN2216或ODN2236及相应的对照ODNs刺激HEK-Blue™mTLR9细胞（表达鼠源TLR9和NF-κB诱导SEAP报告基因,刺激物与HEK-BlueDetection试剂共孵育24小时,NF-ΚB-诱导SEAP的水平在OD655nm检测。

ClassB 型

1.ClassB(typeK)CpGODNs(CpG-BODNs)是18-28摩尔的线性脱氧寡核苷酸。CpG-BODNs是包含一个或多个6摩尔CpG二核苷酸的完整PS骨架结构序列。人源的最佳序列是GTCGTT[1]，鼠源的最佳序列是GACGTT[2]。
2.CpG-BODNs是B细胞和NK细胞的强刺激剂，对于IFN-a分泌的刺激效果却较弱[3,4]。CpG-BODNs表现出较好的抗肿瘤效果以及Th1型佐剂的活性。
3.文献参考：HartmannG&KriegAM.,2000.MechanismandfunctionofanewlyidentifiedCpGDNAmotifinhumanprimaryBcells.JImmunol.164(2):944-53.2-KriegAM.etal.,1995.CpGmotifsinbacterialDNAtriggerdirectB-cellactivation.Nature.374(6522):546-9.3-HartmannG.etal.,2000.DelineationofaCpGphosphorothioateoligodeoxynucleotideforactivatingprimateimmuneresponsesinvitroandinvivo.JImmunol.164(3):1617-24.4-GürselM.etal.,2002.DifferentialandcompetitiveactivationofhumanimmunecellsbydistinctclassesofCpGoligodeoxynucleotide.JLeukocBiol.71(5):813-20.
用不同浓度的B-classCpGODNs,ODN1668,ODN1826,ODN2006或ODN2007及相应的对照ODNs刺激HEK-Blue™hTLR9细胞（表达人源TLR9和NF-κB诱导SEAP报告基因,刺激物与HEK-BlueDetection试剂共孵育24小时,NF-ΚB-诱导SEAP的水平在OD655nm检测。
用不同浓度的B-classCpGODNs,ODN1668,ODN1826,ODN2006或ODN2007及相应的对照ODNs刺激HEK-Blue™mTLR9细胞（表达鼠源TLR9和NF-κB诱导SEAP报告基因,刺激物与HEK-BlueDetection试剂共孵育24小时,NF-ΚB-诱导SEAP的水平在OD655nm检测。

ClassC型

1.ClassCCpGODNs(CpG-CODNs)结构是ClassA和B的混合体。它包含了完整的PS骨架和CpG回文序列。
2.C-ClassCpGODNs可以较强的引起pDC分泌IFN-a，在刺激B细胞时也可以得到较好的效果。C-ClassCpGODNs是很强的Th1-诱导性佐剂。
3.文献参考：VollmerJ.etal.,2004.CharacterizationofthreeCpGoligodeoxynucleotideclasseswithdistinctimmunostimulatoryactivities.EurJImmunol.34(1):251-62.
 
用不同浓度的C-classCpGODNs,ODN2395或ODNM362及相应的对照ODNs刺激HEK-Blue™hTLR9细胞（表达人源TLR9和NF-κB诱导SEAP报告基因,刺激物与HEK-BlueDetection试剂共孵育24小时,NF-ΚB-诱导SEAP的水平在OD655nm检测。
用不同浓度的C-classCpGODNs,ODN2395或ODNM362及相应的对照ODNs刺激HEK-Blue™mTLR9细胞（表达鼠源TLR9和NF-κB诱导SEAP报告基因,刺激物与HEK-BlueDetection试剂共孵育24小时,NF-ΚB-诱导SEAP的水平在OD655nm检测。

小编教您如何正确选择ODN类型
InvivoGenODN的品质经专业的实验室检测，并发表文献。绿字部分：实验结果表明，从InvivoGen购买的CpG-C，不同批次的产品刺激细胞并产生IgG的效果均一稳定，而从Sigma和Coley购买的产品活性则非常不稳定。