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蚂蚁淘常见平行进口产品有:
Thermofisher旗下Gibco培养系列、ABI细胞计数仪及PCR仪、Invitrogen分子生物学试剂及Qubit3.0、Ambion的RNA相关试剂、Molecular probes试剂、Pierce蛋白相关试剂盒、Nanodrop One/OneC;Parafilm封口膜;Viskase透析袋;Sigma-Aldrich试剂;AccuStandard 标准品;Millipore抗体;Glen Research 核酸合成试剂;Bio-Rad电泳仪及PCR仪;Nanocs的PEG聚合物; Chromotek羊驼抗体; Polysciences转染试剂; Echelon-inc 脂类研究试剂盒; R&D Systems抗体及Elisa试剂盒; Jackson二抗及封闭血清; Biotium 荧光染料;NEB内切酶及NGS相关产品; Athens Research & Technology人类蛋白及抗血清; Illumina二代测试试剂盒; Tocris 小分子试剂; TwistDx恒温扩增试剂盒(RPA); Enzymatics二代测序酶;Novus抗体及Elisa试剂盒;AG scientific潮霉素B、放线菌酮、G-418;Plantmedia植物培养系列及抗体;Agilent 2100生物分析仪;Biolog耗材;Biomatik的Elisa试剂盒;Covaris基因打断仪;CST抗体;Dharmacon的siRNA产品。
构建哺乳动物或大肠杆菌表达载体的最简单方法。
克隆通常受到成本,劳动强度和限制酶位点不相容性的限制。传统的体外克隆需要多种末端连接酶(例如T4连接酶,拓扑异构酶,平末端连接酶)或特定的链交换重组酶(例如CRE,loxP,Gateway BP,LR重组酶)。产生突出的末端或平末端需要通过限制酶消化或末端抛光来制备载体,或购买特定的载体和重组酶。
GenTarget的Eco TM PCR克隆试剂盒中的工程大肠杆菌菌株具有增强的同源重组功能,可以进行 体内 连接反应,而无需进行管反应。
GenTarget为 大肠杆菌克隆细胞提供了一系列用于哺乳动物或大肠杆菌表达系统的内置载体。带有内置载体的可立即使用的大肠杆菌细胞的专有工艺可确保低背景和超过90%的阳性克隆率。 革命性的Eco Fusion 体内 PCR 是具有以下功能的最简单的PCR克隆方法
只需使用与表达载体同源的短臂侧翼的引物对,即可扩增您感兴趣的基因
将1µl纯化的PCR加到工程化的随时可用的克隆细胞中
立即进行改造。
您无需购买表达载体。 优化表达的大肠杆菌或哺乳动物表达载体已经内置在克隆细胞中。您只需选择带有满足您需求的内置载体的克隆细胞即可。
对于大肠杆菌表达,已验证的阳性 克隆可直接用于基于T7或非基于T7的蛋白质表达,具体取决于内置载体, 从而消除了向表达菌株(如BL21)的第二次转化。[ 注意:如果您的靶标有剧毒,将其直接克隆到表达菌株中可能会造成困难。对于此类情况,请使用我们的自控PCR克隆细胞(货号:IC-1003) ]
简便的Eco PCR克隆方法消除了其他克隆方法的劳动强度大,有时麻烦的载体制备过程。不需要任何体外试管反应,例如连接,拓扑连接或输注反应。
让 E Coli 在体内为您完成这项工作…并直接在表达菌株中完成!
GenTarget提供了一系列带有不同内置载体的Eco克隆试剂盒。请检查我们的产品线(Eco PCR Cloning Kits)以了解详细信息。
GenTarget的InTag TM高效蛋白质递送系统使您可以将蛋白质直接引入细胞,其效率比poly-A融合标签高10到40倍,而对蛋白质功能几乎没有影响。
高效的蛋白质输送–功能分析所需的蛋白质更少
能够传递大蛋白(> 1000个氨基酸)
与细胞类型无关—可以与许多不同的哺乳动物细胞一起使用
快速交付,可轻松获得蛋白质功能(<5分钟)
蛋白质功能的可逆传递
非侵入性递送—只需添加到细胞培养中
可控制的递送-通过改变浓度与靶向蛋白融合后的靶向递送
将蛋白质直接引入细胞是研究蛋白质功能的关键步骤。与DNA转染不同,在DNA转染中,将转录活性基因导入通过细胞机制制造蛋白质的活细胞中,蛋白质递送不会引入任何外源DNA,并且与细胞转录和翻译机制无关。因此,它避免了在宿主基因组中发生插入诱变的潜在风险,并且所传递的蛋白质在进入细胞后立即起作用。
已经开发了几种蛋白质递送方法,包括电穿孔,显微注射,蛋白质融合和传统的阳离子脂质载体。在这些方法中,蛋白质融合传递 无疑是最容易与非细胞毒性蛋白质一起使用的方法, 并且适用于大规模应用。因此,这是最有吸引力的治疗方法。
蛋白质融合递送取决于被称为蛋白质转导结构域(PTD)的短阳离子肽,该肽与目标蛋白质融合。通常包含多个(7〜15)精氨酸的PTD可以通过不完全了解的机制有效地穿过质膜。
在许多病毒蛋白中发现的天然PTDs具有转运质膜的能力。其中包括来自HIV-1的TAT蛋白,流感病毒血凝素蛋白(HA2),单纯疱疹病毒1(HSV-1)DNA结合蛋白VP22和果蝇触角(Antp)同源转录因子。
根据噬菌体筛选和点突变筛选的结果,GenTarget已开发出InTag TM,这是一种专有的高效蛋白质递送系统,采用了工程化的PTD。根据细胞类型的不同,具有37个氨基酸的InTag TM PTD对靶蛋白功能几乎没有影响,并且显示出比聚精氨酸融合标签高10到40倍的效率。与InTag TM PTD 融合的靶蛋白可以有效地传递到各种活细胞中。
Gentarget的InTag TM 蛋白质递送结构域已整合到我们的Eco PCR克隆产品(目录号:即将推出)中,可用于大肠杆菌或哺乳动物表达 转染就绪的蛋白质。纯化后,可以将用InTag TM PTD 表达的蛋白简单地应用于培养的哺乳动物细胞,以进行体外功能测定。
GenTarget还提供了许多纯化的,可转染的蛋白(请参阅产品链接)。

在所需宿主细胞系中为所需靶标生成组成型或诱导型表达稳定细胞

GenTarget稳定的细胞系服务为您构建细胞系提供了一种非常经济高效的方法。使用我们专有的慢病毒载体,我们会将您的靶基因亚克隆到我们的慢病毒载体中,生成慢病毒颗粒,依次感染您所请求的细胞系,并选择能持续高水平表达您的基因的细胞克隆。
对于可诱导表达的细胞系,我们将首先用表达TetR阻遏物的颗粒感染细胞以制成TetR稳定的细胞系,然后感染目标表达颗粒以产生四环素诱导的稳定细胞系。
我们专有的suCMV启动子具有最强的表达效率,可为您的靶标提供极高的表达水平。我们独特的技术确保了快速的周转时间。在验证靶基因的整合后,细胞系作为低温保存的小瓶运输。我们将与您合作,确保细胞系符合您的要求,以便您获得最好的质量和最优惠的价格。
构建包含您的基因和所需选择标记的慢病毒载体
产生慢病毒
转导您要求的细胞系
选择稳定转导的高表达细胞
通过基因组PCR验证基因整合
通过Western Blot验证表达最高的克隆(如果适用)
提供两个稳定细胞的低温小瓶以及最终报告
为了使细胞系稳定,必须将靶标整合到宿主细胞的基因组中以进行稳定的组成型表达。随机整合(例如通过转染)显示出取决于整合位点的广泛表达水平。另外,随机整合通常导致靶标和选择标记的独立整合,因此有必要大规模筛选选择的阳性克隆。通常少于百分之十的抗生素抗性克隆表达转基因。相反,慢病毒转导倾向于在高转录水平位点(热点)与完整的病毒基因组整合。嵌入基质附着区(MARs)序列的工程化慢病毒转移载体可以提供与位置无关的转基因表达。与传统的稳定细胞系构建相比,
工程化的内部慢病毒载体可提供高效基因整合,假阳性率极低
安全的,自灭活的,高滴度的慢病毒颗粒可以将您的基因传递到各种细胞系中,包括非分裂,原代或干细胞
靶标蛋白的表达可以通过荧光成像进行追踪和监测,从而可以对整合的细胞进行分类或选择(荧光蛋白不会与靶标融合)。
我们的专家在慢病毒克隆和表达方面拥有多年经验
快速的周转时间
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