Chromatrap ChIP实验系统的独特固态性质直接适合于人类来源原代细胞系的分析。抗体-捕获技术的高特异性、固相萃取中固有的极低遗留以及低染色质负荷水平三者结合可导致原代细胞来源出现优良染色质下拉。在新的应用笔记中,来自斯旺西大学的研究团队使用Chromatrap ChIP实验系统从采集自人类子宫组织的子宫内膜间质细胞中分离出组蛋白标记。研究结果表明,新款固相萃取系统所得结果优良。
子宫内膜由覆盖有间质(包含血管、免疫细胞以及子宫内膜间质细胞)的单层柱状上皮细胞组成。在月经周期期间,增殖、分化和退化阶段的特征是细胞形态发生明显变化。周期的高潮部分带有间质细胞层的蜕膜。受雌激素和孕激素影响,所述细胞生理变化涉及到对许多不同基因的细微控制 - 其中一些已被确认为正在受表观遗传学的调控。
有关子宫内膜中表观遗传调控只有有限的信息。子宫内膜表观遗传学研究理解的临床转化依赖于对外科手术和患者活检样品的体外分析。染色质免疫共沉淀(ChIP)是一项用于研究调控蛋白质和表观遗传标记之间相互作用的技术,且具有特异性基因组DNA区域或靶基因。细胞分化的表观遗传变化普遍存在,从而使ChIP实验成为研究子宫内膜发育中分子机制的宝贵工具。
在这项为期较短的研究中,作者详细描述了从小型、管吸活检标本中分离出子宫内膜间质,标本采集自在诊所治疗不孕不育的患者。多达106个细胞的分离和培养被证实足以产生高质量染色质,且在正负基因位点产生共同富集表观遗传学调控标记的后续IP。所述甲基化组蛋白的丰度依赖于所选兴趣基因的染色质结构和构象。
然后,基于不同组蛋白甲基化标记的存在,就基因位点相对于转录因子的可接近性做出了一些推理。H3K27Me3被认为与基因转录的压制性功能相关,而H3K4me3始终与活性基因表达相关。