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biossusa不同样品的加载控制选择

正在研究各种各样的蛋白质。帮助选择加载控件,常用 加载控件 来自细胞质,线粒体和细胞核的蛋白质的分析见下文。


细胞质蛋白 

肌动蛋白

在蛋白质印迹分析中,α和β肌动蛋白均已用作上样对照。但是,在选择肌动蛋白作为负载对照之前,应确保它是一个适当的对照,各治疗组之间差异很小甚至没有差异。细胞生长条件的变化确实会破坏肌动蛋白的合成。此外,

鉴于肌动蛋白蛋白倾向于以很高的浓度存在于细胞中,因此必须确保其动态检测范围,避免信号饱和和肌动蛋白蛋白水平变化。

 

甘油醛3-磷酸脱氢酶 (GAPDH,G3PD,GAPD)

GAPDH是一种结合RNA的管家蛋白,在整个物种中高度保守。值得注意的是,一项综合研究表明,GAPDH mRNA水平在不同组织类型之间存在显着差异,但在年龄和性别方面保持不变。因此,在使用相同类型组织的分析中,这是有用的加载控制。在其他情况下,例如在两种不同类型的组织之间进行分析,GAPDH并不是可靠的控制方法。

 

小管蛋白

存在五种微管蛋白(α,β,γ,δ和ε),并且在整个物种中高度保守。其中,α-,β-和γ-微管蛋白已被用作上样对照。由于微管蛋白广泛参与细胞增殖,因此许多化学物质可影响体内的微管蛋白表达  

 

文库林

Vinculin是用作Western印迹上样对照的另一种细胞骨架蛋白。它是细胞-细胞和细胞-基质连接的主要成分之一。由于其体积大,所以将vinculins用作高分子量蛋白质的上样对照。

2-1

核蛋白

拉明斯

核纤层蛋白是核纤层蛋白的结构成分,它们支持核被膜,并参与细胞周期中核被膜的分解和重新形成。在动物细胞中,三个基因编码三种类型的至少七个lamin。胃泌尿后表达A型lamins,C型lamins的表达是组织特异性的,而B型lamins存在于每个细胞中。在lamin中,Lamin B1在整个物种中都是保守的,通常用作核蛋白研究的负载对照。值得注意的是,Lamin B1蛋白不适合作为无核被膜样品的上样对照。

 

TATA盒结合蛋白(TBP)

TATA盒存在于10-20%的人类基因启动子中。TBP是高度保守的通用转录因子,在通过RNA聚合酶II进行基因转录之前,它与TATA box DNA序列特异性结合。翻译后修饰可能会导致蛋白质印迹上TBP分子量的微小变化。 

 

增殖细胞核抗原(PCNA)

PCNA参与真核DNA复制。它是DNA聚合酶δ的辅因子,在细胞周期的S期期间在细胞核中表达。PCNA在从酵母到灵长类动物的物种中高度保守。但是,由于PCNA的功能是DNA复制,因此对于非增殖细胞或经过抗增殖处理的细胞,PCNA的负荷控制很差。

 

线粒体蛋白

VDAC1 / porin

电压依赖性阴离子通道(VDCA)是一类孔蛋白家族蛋白,是真核细胞中线粒体外膜的主要蛋白。在脊椎动物的三个成员(VDAC1,VDAC2和VDAC3)中,VDAC1在许多物种中都是保守的,并存在于线粒体外膜中。它在心脏,肝脏和肌肉组织中表达。由于存在可变剪接,因此存在VDAC1的多个变体。

 

细胞色素C氧化酶/ COX4I1

线粒体内膜中的细胞色素C氧化酶是线粒体电子传输链的最后一个酶复合物。该复合物由线粒体和核基因编码的13个亚基组成。细胞色素C氧化酶的亚基IV具有两个同工型(同工型1和2),由两个核基因(COX4I1和COX4I2)编码。亚型1在肺组织中普遍表达,而亚型2在肺组织中高度表达。Isoform I COX4I1通常用作加载控件。


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