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EnCorBio的重组人神经丝NF-L <br> Cat#Prot-r-NF-L
神经丝是神经元中特有的10 nm或中间丝蛋白,主要由四种主要蛋白NF-L,NF-M和NF-H组成。NF-L是神经丝低分子量或轻分子量多肽,在68-70kDa的SDS-PAGE凝胶上运行。这种非常丰富的蛋白质可能在轴突损伤和/或变性后渗入血液和CSF。结果,人们对这种蛋白质作为中枢神经系统损害,变性和疾病的替代生物标记物的检测有着相当大的兴趣。该蛋白制品可以用作ELISA中的标准品或产生与人NF-L反应的新型抗体。
EnCorBio的FOX3 / NeuN的山羊多克隆抗体<br> Cat#GPCA-FOX3
在90年代初期,一种不寻常的方案导致了针对神经元核和近端周围核成分的小鼠单克隆抗体的产生(1)。因此,该组分被命名为“ NeuN”,并在SDS-PAGE印迹中显示对应于46和48kDa处的两个蛋白条带。该抗体已广泛用作可靠的神经元标记,显然在所有测试的脊椎动物中都与神经元结合。绝大多数神经元是强烈的NeuN阳性,因此NeuN免疫反应性已被广泛用于鉴定神经元。然而,直到2009年Kim等人的研究才知道NeuN蛋白的身份。(2)表明它与FOX3相同,FOX3是最初在秀丽隐杆线虫中鉴定的基因产物的哺乳动物同源物并命名为FOX1(2,3)。有三种哺乳动物FOX1蛋白同源物FOX1,FOX2和FOX3,据信它们在调节mRNA剪接中具有作用(4)。这三个都包含几乎相同的中央RNA识别基序或RRM结构域,这是在许多蛋白质中发现的约90个氨基酸的区域。FOX3的不同蛋白同工型来自两个外显子的交替剪接,其编码接近C端和短C端延伸的插入片段(5)。延伸序列包括一个C端脯氨酸酪氨酸序列,其后为疏水性氨基酸(Φ-PY),已知该蛋白可将蛋白质靶向细胞核,显然是在某些神经元的细胞核和细胞质中都存在FOX3(5)。
产生了仅基于N末端序列而不包括RRM结构域和C末端区域的针对重组人FOX3构建体的GPCA-FOX3抗体。FOX1,FOX2和FOX3的N端区域保守性相对较差,因此我们能够获得识别FOX3而不识别FOX2或FOX1的抗体。结果,已知GPCA-FOX3的表位在该构建体内,特别是氨基酸1-99。我们使用相同的免疫原分别产生了针对FOX3,CPCA-FOX3和MCA- 1B7的鸡多克隆和小鼠单克隆抗体。我们还产生了兔多克隆抗体,RPCA-FOX3,针对对应于与KLH偶联的人FOX3的氨基酸5-24的氨基酸的肽。所有这些FOX3 / NeuN抗体均可用于定量不同物种的原代细胞培养或组织切片中的神经元/神经胶质比。

EnCorBio小鼠单克隆抗体对髓鞘碱性蛋白<br> Cat#MCA-7G7
髓磷脂碱性蛋白(MBP)是神经系统轴突周围髓鞘的主要蛋白之一。由于分子量相对较低且丰度高,因此30年前从纯化的蛋白质中确定了蛋白质序列(1)。该蛋白质由中枢和神经系统中的少突胶质细胞产生,因此针对MBP的抗体是该细胞类型的良好标记。在外周神经系统中,MBP是由有髓的雪旺氏细胞表达的,因此该抗体可以用于鉴定培养物或切片材料中的这些细胞。在中枢神经系统中,通过从单个基因交替转录产生的四种不同形式的蛋白质,蛋白质产物在人体内的分子量分别为21.5、20.5、18.5和17.2kDa。啮齿动物的单个基因也产生4种不同的蛋白质,但剪接机制不同,产生4种形式,大小略有不同,分别为21.5、18.5、17和14kDa。一些兴趣集中在MBP作为多发性硬化症小鼠模型(MS,3)和人类患者(4)中潜在的重要自身抗原上。检测释放到血液和脑脊液中的MBP有可能作为MS脱髓鞘和轴突丢失以及其他相关损害和疾病状态的替代生物标志物(例如5)。
MCA-7G7抗体是针对从牛脑中进行生物化学纯化的MBP制剂制备的。它可用于鉴定神经细胞培养物中的少突胶质细胞和雪旺氏细胞,可视化切片材料中的髓鞘和髓鞘细胞,并探测MBP基因产物的蛋白质印迹。该抗体对醛固定也相当不敏感,因此可以用于石蜡切片的免疫组织化学。MCA-7G7抗体与所有四个CNS MBP亚型结合,因此该抗体的表位位于所有四个基因产物共有的“核心”中。进一步作图将表位定位于肽TPPPSQGKG,即人21.5kDa序列的氨基酸125-133。使用重叠的肽产生了数据,这表明最后四个氨基酸SQGKG可能是表位的关键元素。该肽在大鼠,小鼠,牛和许多其他物种中是不变的,因此该抗体将具有广泛的适用性。相反,我们的替代小鼠单克隆MCA-7D2仅与21.5kDa和18.5kDa大鼠MBP同种型结合,但与所有牛和人同种型结合,将表位映射至AEGQRPGFGYGGRASDYKSAHKGFKGVDAQGTLSKIFKLG,即人21.5kDa序列的氨基酸145-184。
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