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EnCorBio的FOX3 / NeuN的山羊多克隆抗体<br> Cat＃GPCA-FOX3
在90年代初期，一种不寻常的方案导致了针对神经元核和近端周围核成分的小鼠单克隆抗体的产生（1）。因此，该组分被命名为“ NeuN”，并在SDS-PAGE印迹中显示对应于46和48kDa处的两个蛋白条带。该抗体已广泛用作可靠的神经元标记，显然在所有测试的脊椎动物中都与神经元结合。绝大多数神经元是强烈的NeuN阳性，因此NeuN免疫反应性已被广泛用于鉴定神经元。然而，直到2009年Kim等人的研究才知道NeuN蛋白的身份。（2）表明它与FOX3相同，FOX3是最初在秀丽隐杆线虫中鉴定的基因产物的哺乳动物同源物并命名为FOX1（2,3）。有三种哺乳动物FOX1蛋白同源物FOX1，FOX2和FOX3，据信它们在调节mRNA剪接中具有作用（4）。这三个都包含几乎相同的中央RNA识别基序或RRM结构域，这是在许多蛋白质中发现的约90个氨基酸的区域。FOX3的不同蛋白同工型来自两个外显子的交替剪接，其编码接近C端和短C端延伸的插入片段（5）。延伸序列包括一个C端脯氨酸酪氨酸序列，其后为疏水性氨基酸（Φ-PY），已知该蛋白可将蛋白质靶向细胞核，显然是在某些神经元的细胞核和细胞质中都存在FOX3（5）。
产生了仅基于N末端序列而不包括RRM结构域和C末端区域的针对重组人FOX3构建体的GPCA-FOX3抗体。FOX1，FOX2和FOX3的N端区域保守性相对较差，因此我们能够获得识别FOX3而不识别FOX2或FOX1的抗体。结果，已知GPCA-FOX3的表位在该构建体内，特别是氨基酸1-99。我们使用相同的免疫原分别产生了针对FOX3，CPCA-FOX3和MCA- 1B7的鸡多克隆和小鼠单克隆抗体。我们还产生了兔多克隆抗体，RPCA-FOX3，针对对应于与KLH偶联的人FOX3的氨基酸5-24的氨基酸的肽。所有这些FOX3 / NeuN抗体均可用于定量不同物种的原代细胞培养或组织切片中的神经元/神经胶质比。
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EnCorBio的pNF-H ELISA版本2 <br> Cat＃ELISA-pNF-H-V2神经丝亚单位NF-H是三种所谓的神经丝三联体蛋白质之一，它们是神经元的主要结构成分。这些蛋白质特别集中在大型投射神经元的轴突中，它们显然占据了大部分细胞质。NF-H蛋白具有一个不寻常的C末端区域，该区域包括数十个基于赖氨酸-丝氨酸-脯氨酸序列（单字母氨基酸代码的KSP）的肽。在轴突中，这些KSP位点在丝氨酸残基上被严重磷酸化，而树突和周核中的NF-H形式通常不被磷酸化（1,2）。结果，NF-H的KSP磷酸化形式，通常称为pNF-H，是轴突特异性形式。 我们已经开发了灵敏的ELISA试剂盒，可以准确定量pNF-H蛋白的水平。该蛋白丰富并且对蛋白酶具有抗性，因此，在轴突损伤或变性后，可以通过诸如此类的ELISA轻松检测到pNF-H。多种严重损伤和疾病状态与轴突妥协有关，例如肌萎缩性侧索硬化，多发性硬化，脑外伤和脊髓外伤。越来越多的同行评审出版物使用这种和类似的分析方法来监测与这些以及各种中枢神经系统损害和疾病状态相关的持续性轴突丧失。该方法的第一个版本使用了两种亲和纯化的多克隆抗体，一种用于捕获抗原的鸡，一种用于检测的兔，已在同行评审的出版物中进行了描述（3,4）。该测定法由EnCor和其他几家供应商销售。我们也开发和销售了使用两种小鼠单克隆抗体的第二代pNF-H测定法，尽管也可以使用第一代测定法，请参见ELISA-pNF-H-V1。在同行评议的出版物（5）中也描述了这种第二代测定法。