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Euriso-top蛋白质组学在过去十年中,基于质谱(MS)的蛋白质组学已成为生物学家必不可少的工具。质谱仪从复杂的生物样品中鉴定数千种蛋白质的能力彻底改变了科学实验。


但是,要完全了解蛋白质组在健康和疾病中的功能,必须具备准确定量许多不同类型生物样品中蛋白质的能力。更快,更高分辨率的质谱仪的发明实现了复杂蛋白质组动力学的量化。通常使用重的稳定同位素来生成精确的定量蛋白质组学数据。


除了质量差异外,用重度稳定同位素标记的肽与“轻”或未标记的肽具有相同的生化特性。将重肽与轻肽混合可将肽对共洗脱到质谱仪中,从而可以根据质量差异轻松区分肽。定量分析处于不同生物学条件下的蛋白质组之间的差异或通过使用重质肽作为内标或对照。


Euriso-Top提供了多种CIL生产的稳定同位素试剂,用于标记任何蛋白质组以进行定量MS分析。这些稳定的同位素质谱方法通过定量的生物标志物分析和疾病动物模型的定量蛋白质组学分析,使科学家更接近于治愈人类疾病。



Euriso-top提供了多种同位素标记的气体,这些气体由多种化合物,形式,同位素和富集组成。每种气体都填充在我们的实验室中,并且要特别注意对其进行控制和处理。

 



Euriso-top体内蛋白质表达

富含同位素的蛋白质通常是通过在同位素培养基中培养的基因工程大肠杆菌BL21(DE3)细胞中过表达而产生的。当细胞达到生长的对数中期时,开始蛋白质诱导,通常在几个小时后停止。裂解细胞并收集和纯化蛋白质。同位素生长培养基通常包含13 C 6葡萄糖或13 CD 7葡萄糖作为唯一碳源,以及富含15 N的氯化铵作为唯一氮源。通过使用含有氨基酸的培养基可以提高蛋白质产量。


选择性氨基酸类型的标记通常可以通过在诱导之前将标记的氨基酸直接添加到培养基中来实现。当细菌系统不能以适当折叠的形式产生靶蛋白时,通常依赖于真核表达系统。用于标记蛋白质的最常见的真核表达系统是使用昆虫幼虫细胞的杆状病毒表达载体系统(BEVS)。酵母和哺乳动物细胞也用于蛋白质表达。对于昆虫和哺乳动物培养基,可以进行选择性和统一的标记。


无论表达系统如何,大于约30 KDa的蛋白质通常都需要氘化以简化光谱并减少与1H双极偶联相关的谱线扩展。



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