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Epigentek快速,有效地制备DNA,蛋白质和染色质对于进行下游分析至关重要。我们的样品制备套件套件几乎适用于所有工作流程,无论是为ChIP-Seq或ChIP-PCR应用分离染色质,还是从各种起始原料制备亚硫酸氢盐-Seq或MS-PCR的DNA。我们的样品制备套件使您可以直接从提取到反应,为您的实验工作流程提供无数种可能性和灵活性。我们的DNA,蛋白质和染色质制备试剂盒是无数研究机会和下游应用的起点。
DNA甲基化是一种主要的表观遗传修饰,涉及通过DNA甲基转移酶在胞嘧啶的5位添加一个甲基以形成5-甲基胞嘧啶(5-mC)。此表观遗传标记具有打开或关闭基因的能力,可以通过细胞分裂来继承。DNA甲基化是第一个被发现的表观遗传标记,在人类正常发育,衰老,肿瘤发生以及其他遗传和表观遗传疾病中起着重要作用。类似地,进一步发现,通过TET酶家族的5-mC氧化引起的DNA羟甲基化与控制基因表达有关,并且是DNA甲基化循环中重要的DNA脱甲基过程。
多年来,测量5 mC的技术已经发展起来,并且从基于热的方法到基于化学的方法都可能不同。亚硫酸氢盐转化是一种流行的技术,用于制备用于基因特异性水平的甲基化分析的DNA。该过程将胞嘧啶转化为尿嘧啶,同时保留5-甲基胞嘧啶完整,以允许以单核苷酸分辨率进行甲基化分析。不仅必须进行有效的转化,而且由于苛刻的化学反应通常会使DNA降解,因此回收率必须达到最佳。
全面了解样品的甲基化状态是在进行下游应用之前预筛选样品的明智方法。在更深入的研究和昂贵的测序之前,可以使用我们的MethylFlash 全球DNA甲基化预筛选工具。对于这种基于ELISA的方法而言,不需要昂贵的设备或专业知识的常规方法(例如质谱法或色谱法)。此外,与基于LUMA或LINE-1,Alu和LTR的测定法不同,MethylFlash技术可直接对实际的整体DNA甲基化进行定量。
研究DNA甲基化的其他方法包括称为甲基化DNA免疫沉淀(MeDIP)的基于抗体的技术,该技术用于在全基因组范围内研究基因特异性DNA甲基化,测量DNA甲基转移酶(DNMT)的活性/抑制测定和其他与DNA甲基化过程有关的酶,以及涉及甲基化特异性PCR(MS-qPCR)的扩增技术,用于研究基因或序列特异性DNA甲基化。

使用小干扰RNA(siRNA)或反义寡核苷酸的靶向基因敲低是研究基因功能的有价值的技术。基因敲低导致信使RNA减少,随后蛋白质表达减少。另外,基于CRISPR / Cas9的基因编辑也是改变基因组的通用方法。这些基因编辑和沉默方法为研究人员提供了对生物学过程尤其是疾病的宝贵见解。
使用CRISPR / Cas9系统编辑基因组和表观基因组是一种精确而简单的基因编辑方法。研究人员使用的其他技术包括锌指系统和TALEN系统。CRISPR / Cas9基因编辑工具通过使用称为Cas9的酶切割DNA来工作。短RNA向导(gRNA)与Cas9相连,并被编程为与某个基因组序列结合,以指示Cas9切割DNA的位置。研究人员可以使用此基因编辑工具通过更改RNA导链序列来删除任何基因。
CRISPR / Cas9基因编辑系统还可用于修饰表观遗传状态,例如特定部位的DNA甲基化或组蛋白修饰。可以将修饰DNA的组蛋白或酶融合到dCas9(催化失活的Cas9)上,并在不切割DNA的情况下编辑表观基因组。一个CRISPR / Cas9抗体可用于检测靶细胞中的CRISPR / Cas9表达,并确认和验证gRNA和Cas9载体是否已成功转染。
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