Cut 1-2 ug of plasmid DNA with EcoR I + Hind III using NEB 10 x buffer 2.1 in a final volumes of 20-30 ul and incubate at 37 C for 2 hours. Alqueire 3-5 ul of the digestions and run gel to examine the digestion.
加一种buffer就行了啊,你不会50μl体系各加了5μl吧。。酶的protocal上有写在NEB不同buffer中的酶活力,你选一个都是100%的就行了,NEB官网也有,http://www.neb.sg/tools-and-resources/interactive-tools/double-digest-finder,你这两种酶应该用BUFFER2.1
mcronnie 加一种buffer就行了啊,你不会50μl体系各加了5μl吧。。酶的protocal上有写在NEB不同buffer中的酶活力,你选一个都是100%的就行了,NEB官网也有,http://www.neb.sg/tools-and-resources/interactive-tools/double-digest-finder,你这两种酶应该用BUFFER后期尝试了只用2.1但是效果也还是不行, 也换了孵育的时间。 跑胶的时候就还是 似乎是没有条带。