【求助】有没有人用过NEB的IMPACT－TWIN纯化系统，效果如何？

您好！感谢您对NEB产品感兴趣。IMPACT系统有其优势即纯化方法简单，可以不带入外源性的氨基酸。但是这个系统也有其缺点：1. 推荐使用的内切酶SapI对温度敏感，比较容易失活，使用时需要加大酶量。2. 因为不带有促进蛋白折叠的标签（如MBP），表达出可溶性蛋白的几率降低。而纯化系统不适合包涵体的纯化。3. 如果成功表达出融合蛋白，纯化时有一部分蛋白自剪切切不下来，这是因为和intein相连的氨基酸不是推荐的氨基酸，具体哪些氨基酸合适，哪些不合适您可以登录http://www.neb-china.com/cn/products/expression/IMPACT_Vectors.htm查看。目前国内也有表达很成功的例子。总之，蛋白表达是比较复杂的实验，您需要先分析您要表达的蛋白（如细胞定位、稀有密码子、疏水性等），再根据不同表达系统的特点选择相应的系统。当然如果有文献参考就比较好了。