StressMarq硫黄素T测定

硫黄素T是一种荧光染料，可与富含β片层的结构（例如α突触核蛋白原纤维中的结构）结合。结合后，染料的发射光谱发生红移并增加了荧光强度。以下方案用于使用α突触核蛋白预制的原纤维和单体生成硫黄素T测定法。

1. 准备dH2O中的1mM硫黄素T储备溶液（新鲜制备，并通过0.2μm注射器过滤器过滤）。

2. 在PBS pH 7.4中稀释硫黄素T，使每孔中硫黄素T的最终浓度为25μM（每孔体积= 100μL）。板：Lumox 96多孔板（Sarstedt目录号94.6000.024）。

3. 使用前在室温下解冻α-突触核蛋白等分试样。

4. 将10μM预制纤维或100μM单体（或两者）添加到适当的孔中。用移液器上下吸取混合液。浓度是估算值，需要进行优化以给出良好的信号而不会造成浪费。

5. 密封板并置于37°C的振荡培养箱（600 rpm）中。

6. 使用Softmax Pro软件6.5.1版在Molecular Devices Gemini XPS微孔板读取器上测量荧光。

XPS微孔板读取器设置：

温度：37°C
读取类型：阱扫描
波长：450 nm处的激发和485 nm
PMT 处的发射增益：
每次读取自动闪烁：6次
摇动：读取前20秒

7.重新密封板并放入37°C的振荡培养箱中。

8.定期从1到72小时获取读数。

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StressMarqX品牌 历史介绍:苏州蚂蚁淘生物科技有限公司，作为一家生命科学领域的高科技生物公司，目前代理销售二十多家欧美著名生物技术公司的产品，覆盖了免疫学、细胞生物学、分子生物学、药物筛选、生物制药、食品检测、疫苗生产等领域。

StressMarq蛋白质印迹协议该蛋白质印迹方案应作为每个研究人员建立自己的方案的指南，因为每种试剂都需要针对特定物种，组织类型和应用组合进行优化。块在1X TBST中使用5％脱脂奶粉作为封闭缓冲液。使用过量的封闭缓冲液以完全覆盖印迹。在室温下摇动阻塞1小时。 洗在1X TBST中3 x 4分钟，然后在1X TBS中3 x 4分钟。确保盒子中始终有过量的清洗缓冲液。 一抗孵育稀释TBST中的一抗。在室温下在振荡器上孵育2小时。偶尔检查印迹以确保其被抗体溶液充分覆盖。 洗在1X TBST中3 x 4分钟，然后在1X TBS中3 x 4分钟。确保盒子中始终有过量的清洗缓冲液。 二抗孵育用1X TBST准备第二抗体（浓度取决于所使用的抗体）。在室温下在振荡器上孵育1小时。偶尔检查印迹以确保其被抗体溶液充分覆盖。 洗在1X TBST中3 x 4分钟，然后在1X TBS中3 x 4分钟。确保盒子中始终有过量的清洗缓冲液 侦测用于印迹的ECL检测试剂的体积取决于印迹的大小。通常，您只需要在移印液上用移液管吸取足够的溶液，使其覆盖即可。以1：1的比例混合溶液A和B。用镊子拾起污点，然后轻轻地将边沿紧贴着金边擦拭，以吸干污点中多余的Tris。将污点放在新的（干净的）盒子中，然后将检测试剂吸到污点上，以使其均匀覆盖。孵育印迹（在黑暗中）5分钟。用镊子捡起污点，并用擦布擦干多余的试剂。对印迹成像。