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StressMarq使用我们的疑难解答指南可以快速找出免疫细胞化学（ICC），免疫荧光（IF），免疫组织化学（IHC），免疫沉淀（IP），流式细胞仪，酶联免疫吸附测定（ELISA）或Western blot（ WB）协议并测试各种解决方案。

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StressMarq免疫沉淀方案该免疫沉淀方案应作为每个研究人员建立自己的方案的指南，因为每种试剂都需要针对特定物种，组织类型和应用组合进行优化。所需试剂电池制备：Tris缓冲盐水。使用10x TBS，pH 7.5（1.0M Tris HCl，1.5M NaCl）。用去离子水将适当的体积稀释至1倍。在室温下储存最多一个月。裂解缓冲液。TBS含有1.0％的适当洗涤剂，1mg.ml牛血清白蛋白BSA和适当的蛋白酶抑制剂。稀释缓冲液。与没有蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液相同。琼脂糖结合物用于裂解物的预处理。预吸收裂解物以去除与一抗和二抗的非特异性结合。使用与一抗和宿主二抗相同物种的琼脂糖正常IgG。使用稀释缓冲液以1：1的比例准备洗涤后的浆料。一抗：对照一抗。对于多克隆抗血清，请使用相同物种的非免疫血清。对于单克隆抗体，请使用相同的同种型和纯度。用于免疫沉淀的琼脂糖结合物。使用与一抗相同种类的琼脂糖二抗偶联物。使用稀释缓冲液以1：1的比例准备洗涤后的浆料。Tris缓冲区。准备0.05M Tris缓冲液，pH 6.8。2个SDS-PAGE样品缓冲液2-巯基乙醇程序通过在冰上将5 x 107细胞在裂解缓冲液中孵育30-60分钟来制备裂解液。涡旋裂解物并以250 xg离心10分钟以去除细胞核。保持上位。通过以100,000 xg离心30分钟或以10,000 x g微量离心30分钟来澄清上清液。预处理裂解物，通过添加琼脂糖结合物去除非特异性蛋白结合。每200 µl裂解液使用10µl对照琼脂糖。在4ºC摇动1小时。以200 x g离心。保存上清液。将200μl含抗原的预处理裂解液分别添加到两个微量离心管中。用稀释缓冲液将体积调至1 ml。将一抗添加到一个管中。对于多克隆抗血清或腹水，请使用0.5-5 µl。对于组织培养上清液，请使用10-100 µl。在第二管中，加入等体积的一抗对照。在冰上孵育一小时。为了进行免疫沉淀，每管加入50µl琼脂糖结合物。在4ºC轻轻摇动混合1小时。将离心管以200 xg的速度离心1分钟，或微量离心5秒钟。用移液管小心除去上清液。轻轻地将沉淀重悬于1 ml稀释缓冲液中。重复洗涤。然后在TBS中洗涤，然后在0.5 M Tris，pH 6.8中进行最终洗涤。如上再次离心。加入20-50 µl样品缓冲液。混合并在100ºC加热5分钟。微量离心，将上清液直接用于非还原性SDS-PAGE。如果需要还原条件，请将上清液转移至新试管中，并添加5％2-巯基乙醇。如上所述混合并加热。电泳蛋白质混合物。染色凝胶或免疫印迹（使用我们的蛋白质印迹方案）进行可视化。存在的条带将包括所使用的抗原和抗体的多肽。 如何选择正确的珠子：物种免疫球蛋白同种型蛋白A蛋白G人IgG1强绑定强绑定人IgG2强绑定强绑定人IgG3无约束力强绑定人IgG4强绑定强绑定人IgM使用抗人IgM人IgE无约束力弱绑定人类IgA无约束力弱绑定小鼠IgG1弱绑定强绑定小鼠IgG2a强绑定强绑定小鼠IgG2b中型装订中型装订小鼠IgG3弱绑定弱绑定小鼠IgM使用抗鼠IgM大鼠IgG无约束力弱绑定大鼠IgG2a无约束力强绑定大鼠IgG2b无约束力中型装订大鼠IgG2c弱绑定中型装订鸡所有同种型无约束力无约束力牛所有同种型中型装订强绑定山羊所有同种型无约束力中型装订豚鼠所有同种型强绑定中型装订仓鼠所有同种型弱绑定中型装订马所有同种型弱绑定强绑定猪所有同种型弱绑定中型装订兔所有同种型强绑定中型装订绵羊所有同种型没有约束力强绑定