蚂蚁淘大讲堂：简单介绍GFP单抗的背景

GFP单抗，又叫GFP单克隆抗体，或维多利亚水母绿色荧光蛋白单抗，是蛋白质研究过程中非常重要的工具，尤其是在鉴定重组的带有GFP标签的蛋白质是否表达或者表达的相对丰度时有着极重要的作用。最常用的GFP单抗基本上都是小鼠单抗，其制备方法和其它的蛋白质的单抗制备过程无异，

1. 1概述

2. 2GFP单抗

3. 3GFP背景

GFP单抗，又叫GFP单克隆抗体，或维多利亚水母绿色荧光蛋白单抗，是蛋白质研究过程中非常重要的工具，尤其是在鉴定重组的带有GFP标签的蛋白质是否表达或者表达的相对丰度时有着极重要的作用。

最常用的GFP单抗基本上都是小鼠单抗，其制备方法和其它的蛋白质的单抗制备过程无异，简单地说就是：重组表达GFP蛋白质作为抗原，也可以人工合成GFP的一段多肽然后偶连载体蛋白作为抗原（一般认为用融合蛋白免疫获得的抗体质量更好），再免疫小鼠，免疫结束后杀死小鼠取其脾脏，将脾脏细胞与骨髓瘤细胞（通常是SP2/0细胞)融合，体外进行选择性培养后经过筛选得到阳性克隆，阳性克隆经过亚克隆后形成稳定的细胞株，将此稳定的细胞株进行大规模体外培养或者注射到小鼠腹腔内诱生腹水，再从培养基或腹水中纯化得到GFP单抗，经过ELISA和WB鉴定无误后即可使用。^[1]下图是ProteinTechGroup公司的GFP单抗（产品编号：66002-1-Ig)Westernblot质检数据，此WB中使带有GST标签的GFP融合蛋白作为检测蛋白，所以分子量比纯GFP分子量大。从图中可以看出此单抗在常规WB中稀释20000倍使用完全可以。

Proteintech公司GFP单抗WB结果

SPINDLIN1promotescancercellproliferationthroughactivationofWNT/TCF-4signaling一文中，作者就是使用了ProteintechGroup的GFP单抗作研究。

GFP即常说的绿色荧光蛋白，最早发现于维多利亚水母，其最大峰值为395nm(紫外)，并有一个峰值为470nm的副峰(蓝光)；发射光谱最大峰值为509nm(绿光)，并带有峰值为540nm的侧峰，由于这一特性，所以它被广泛地应用于分子生物学、遗传学、生物物理学等诸多领域，不止是在水母体内，在一些珊瑚体内也存在这种蛋白，实验室中常用的重组GFP标签更接近水母的GFP，其分子量为27kD左右，但是经过人工改造的GFP的荧光强度比天然的GFP更强，如常听到的eGFP等，同时经过人工改造，GFP不只是可以发绿光，还可以发出其它颜色的光，进一步增加了其应用范围。关于GFP的介绍，可以考虑百度百科GFP词条。^[3]

• 参考资料

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• 1.中国免疫学实验网单抗制备的介绍

• 2.ProteintechGroupGFP单抗说明书

• 3.百度百科GFP词条