英国InnovaBiosciences公司是一家专注于生物偶联技术(bioconjugation)的企业。生物偶联即将两种分子结合在一起而形成一个杂合的偶联物(hybridconjugate),这些偶联结合物(如标记抗体)在世界各大医院和科研机构被广泛使用。InnovaBiosciences公司开发生产的“一步法”抗体标记试剂盒-Lightning-Link 系列产品极大程度的简化了结合标记流程,是目前世界上操作最简便的抗体标记试剂盒。Lightning-Link “一步法”抗体标记试剂盒在进行多因子检测时,我们往往因不能找到多种合适的标记一抗,而不得不选用标记二抗,因此很难避免可能发生的交叉反应及繁琐的洗涤步骤。Lightening-LinK 抗体标记试剂盒系列,提供多种荧光蛋白、酶及荧光素标记等产品,试验操作人员可直接应用于标记一抗,从而避免了因使用二抗带来的交叉反应及非特异性结合等问题。该系列试剂盒具有以下显著特点:1)1或3(以规格而定)玻管Lightening-Link Mix 混合物。2)1管LL-X(X为标记物,如PE或HRP等)修饰试剂。3)1管LL-X萃灭试剂。操作步骤:1)在每10ul抗体样品中加入1ul的LL-Modifier修饰试剂,轻轻混匀。2)打开Ligtening-Link混合物管盖,吸取步骤1已混好的抗体样品至管内冻干混合物中,用吸液器轻轻吸打1-2次,使粉末完全溶解。3)盖上玻璃瓶盖,室温(20-25°C)避光孵育3小时,或过夜。*4)孵育3小时后,按每10ul抗体的量加入1ul LL-淬灭试剂,静置30分钟后即可使用。*不同的标记物,操作步骤略有不同。(操作步骤供参考,以英文原版说明书为准。)标记结合物的保存:对于任何新结合物,推荐保持于4°C条件下。如需长期保存,可添加保护剂。缓冲液及添加剂兼容性:A. 与无胺基缓冲液兼容,包括MES,MOPS,HEPES(浓度10-50mM,pH范围6.5-8.5),LL-Modifier修饰剂提供结合反应的最佳条件。B. 常见的盐(如氯化钠)、螯合剂(EDTA)、糖对偶联反应无影响。C. 叠氮钠(0.02%-0.1%)对结合反应有轻微影响,叠氮钠不可用于HRP标记,其为后者的抑制剂。D. 甘油(up to 50%)对结合效率无影响。若无胺基的缓冲液浓度相对较高,pH值在6.6-8.5范围外,则需要加入更多的LL-midifier修饰剂(/10ul抗体),以此来调整pH值。最佳的pH范围为7.3-7.6左右。F. 避免使用含亲核剂的缓冲液,避免还原剂如DTT和2-巯基乙醇,乙醇胺等。G. 浓度达到或稍低于20mM的Tris对结合效率有轻微的影响。
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